DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化劑MNNG引起的非定標(biāo)突變中的作用.pdf

1、目前對(duì)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞中非定標(biāo)致突變情況的研究尚不多.我們和其它實(shí)驗(yàn)室已有的工作證明哺乳類細(xì)胞中也存在非定標(biāo)突變.我們用攜帶靶基因supF tRNA的穿梭質(zhì)粒pZ189轉(zhuǎn)染在12-24小時(shí)前經(jīng)低劑量烷化劑N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)處理過(guò)的細(xì)胞并使之在其中復(fù)制.在回收的質(zhì)粒中,我們檢測(cè)到了延遲發(fā)生的、高于對(duì)照的突變.其中本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)證實(shí)的發(fā)生非定標(biāo)突變的聚合酶有Polβ、Polζ.該課題繼續(xù)研究了Polκ、Polη與非定

2、標(biāo)突變的關(guān)系.1.建立Polκ和Polη表達(dá)阻斷的細(xì)胞系.我們用反義RNA技術(shù)建立了Polκ表達(dá)下調(diào)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系.FL-Polκ<'->、FL-Polη<'->細(xì)胞中MNNG誘發(fā)的非定標(biāo)性突變率下降.提示Polκ和Polη對(duì)細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的維持有重要作用.但在MNNG處理細(xì)胞后再轉(zhuǎn)入pZ189質(zhì)粒,在FL細(xì)胞MNNG誘發(fā)pZ189質(zhì)粒,supF tRNA基因上的非定標(biāo)性突變的突變頻率為8.6×10<'-4>,在FL-M細(xì)胞為8.9×1