oxLDL與食管癌的關(guān)聯(lián)及機(jī)理探討.pdf

1、研究目的：
　　 以食管鱗癌不同衍變階段的患者為研究對(duì)象,觀察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)與食管鱗癌是否存在關(guān)聯(lián);如果存在關(guān)聯(lián),利用體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)探討其可能的作用機(jī)理。
　　 研究內(nèi)容和方法：
　　 一.oxLDL與食管癌衍變階段的關(guān)聯(lián)性研究
　　 1.研究對(duì)象肥城市食管病變碘染色內(nèi)鏡篩檢及病理活檢確診的食管鱗狀上皮細(xì)胞正常33例,食管基底細(xì)胞增生37例,食管鱗狀細(xì)胞不典型增生47例,食管鱗狀細(xì)胞癌(

2、ESCC)43例。
　　 2.血脂指標(biāo)測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平采用酶比色法測(cè)定;血清白蛋白以溴甲酚綠(BCG)法測(cè)定;oxLDL、oxLDL抗體(oxLDL-Ab)、oxLDL抗體lgG亞型(oxLDL-lgG)和lgM亞型(oxLDL-lgM)水平采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法測(cè)定。
　　 3.統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素分析或

3、多項(xiàng)式Logistic回歸分析,P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 二.oxLDL對(duì)人食管癌細(xì)胞株Eca109增殖的影響及機(jī)理探討
　　 1.甲基四唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)oxLDL及抗體成分對(duì)Eca109細(xì)胞株的增殖抑制率,oxLDL對(duì)阿霉素(ADM)所致Eca109細(xì)胞增殖抑制的影響。
　　 2.細(xì)胞凋亡指標(biāo)的測(cè)定:吉姆薩染色光鏡下觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期改變。

4、>　　 3.RT-PCR和Western blot檢測(cè)oxLDL及其與ADM聯(lián)合對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果：
　　 一.oxLDL與食管癌衍變階段的關(guān)聯(lián)性研究
　　 1.單因素分析顯示:食管癌衍變階段四組中,年齡、血清白蛋白、TC、HDL、LDL、oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG和oxLDL-lgM水平差異有顯著性,而其它因素差異沒

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.隨著食管組織病變加重,血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平趨向降低,而oxLDL-lgM水平趨向上升。調(diào)整年齡、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混雜因素后,四組間oxLDL和oxLDL-lgM水平仍有顯著性差異;而血清oxLDL-Ab和oxLDL-lgG水平無顯著性差異。
　　 3.食管癌衍變階段與血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平呈顯著負(fù)相關(guān),而與o

6、xLDL-lgM水平呈顯著正相關(guān)。
　　 4.調(diào)整年齡、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混雜因素后,oxLDL值增加對(duì)食管癌有保護(hù)作用(OR=0.94,95％CI:0.89-0.99);而oxLDL-lgM增加不典型增生和食管癌的危險(xiǎn)性,OR分別為1.11(95％CI:1.01-1.23)和1.18(95％CI:1.06-1.31)。
　　 二.oxLDL對(duì)人食管癌細(xì)胞株Eca109增殖的影響及機(jī)理探討
　　

7、1.對(duì)細(xì)胞增殖的影響
　　 1.1隨著oxLDL濃度的增加和作用時(shí)間的延長,Eca109細(xì)胞的存活率降低,且呈劑量-時(shí)間效應(yīng)依賴關(guān)系。
　　 1.2 oxLDL-Ab及oxLDL-R-Ab對(duì)Eca109細(xì)胞的活性基本無影響;oxLDL-Ab對(duì)oxLDL所致的細(xì)胞活性抑制無顯著作用;而oxLDL-R-Ab可明顯減少oxLDL所致的細(xì)胞活性抑制作用(抑制率從27.73％降到7.31％,P＜0.05)。
　　 1.3隨

8、著ADM濃度的增加和作用時(shí)間的延長,Eca109細(xì)胞的存活率降低,且呈劑量-時(shí)間效應(yīng)依賴關(guān)系。
　　 1.4 oxLDL可明顯增強(qiáng)ADM所致的細(xì)胞活性抑制(抑制率由ADM組的28.35％增至43.97％,P＜0.05),兩因素存在協(xié)同作用。
　　 2.對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
　　 2.1 oxLDL及ADM使Eca109細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)改變,可見凋亡小體甚至核崩解。
　　 2.2隨著oxLDL濃度的增加和作用時(shí)

9、間的延長,Eca109細(xì)胞的凋亡率升高,有明顯的量效和時(shí)效依賴關(guān)系。
　　 2.3 oxLDL-Ab對(duì)oxLDL所致的細(xì)胞凋亡率無顯著作用;oxLDL-R-Ab可減低oxLDL所致的細(xì)胞凋亡(凋亡率從15.11％降到12.58％,P＜0.05)。
　　 2.4 oxLDL可使ADM誘導(dǎo)Eca109細(xì)胞的凋亡率由11.27％增至19.79％,P＜0.05,主效應(yīng)及其交互作用都顯著,兩因素存在協(xié)同作用。
　　 3.對(duì)

10、細(xì)胞周期的影響
　　 3.1隨著oxLDL濃度的增加,Eca109細(xì)胞周期的S期和G2/M期比例逐漸增加,G0/G1期比例逐漸減少,出現(xiàn)S期阻滯。
　　 3.2 oxLDL-Ab和oxLDL-R-Ab基本不能改變細(xì)胞周期分布,oxLDL-Ab對(duì)oxLDL引起的細(xì)胞周期改變無影響;而oxLDL-R-Ab使oxLDL對(duì)細(xì)胞的S期阻滯作用降低(由29.86％降至24.97％,P＜0.05)。
　　 3.3 oxLDL和

11、ADM單獨(dú)作用使細(xì)胞的S期比例升高(由對(duì)照組的22.03％分別上升至29.86％和62.59％,P＜0.05),出現(xiàn)S期阻滯;oxLDL與ADM聯(lián)合使細(xì)胞的G2/M期比例增至75.66％,P＜0.05,細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。
　　 4.對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響
　　 oxLDL顯著降低Eca109細(xì)胞Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平,升高Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)水平,并使Bcl-2/

12、Bax比值降低。oxLDL和ADM聯(lián)合使Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平較單獨(dú)作用組明顯降低,而Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.隨著食管黏膜上皮細(xì)胞由正常到基底細(xì)胞增生到不典型增生再到食管鱗狀細(xì)胞癌病變的加重,oxLDL及oxLDL-Ab水平呈下降趨勢(shì),與食管癌的發(fā)生呈負(fù)相關(guān);而oxLDL-lgM亞型抗體水平呈上升趨勢(shì),與食管癌的發(fā)生呈正相關(guān)。
　　 2.ox