肉兔腸道菌群結(jié)構(gòu)同源復(fù)合微生態(tài)制劑的研究.pdf

1、基于腸道微生物組學(xué)的原理，依照古代獸醫(yī)用“糞茶”治療牲畜腹瀉的思路，選取肉兔為研究對(duì)象，從其糞便中富集發(fā)酵出以益生菌為主的復(fù)合微生態(tài)制劑，飼喂幼兔并觀察這種復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉兔的益生效果，并且設(shè)計(jì)了一種以ERIC-PCR基因指紋圖譜為基礎(chǔ)快速分析糞便主要菌群結(jié)構(gòu)的方法。本研究主要內(nèi)容包括：
　　⑴借鑒Cinquin等提出的新型固定化細(xì)胞發(fā)酵模型，設(shè)計(jì)了一種適宜于腸道有益菌群生長(zhǎng)的厭氧固定化發(fā)酵裝置；為了驗(yàn)證裝置的預(yù)期性能并篩選出適

2、宜的培養(yǎng)條件，用該裝置進(jìn)行了腸道菌群培養(yǎng)試驗(yàn)。培養(yǎng)時(shí)先用凝膠小球固定糞樣中的菌群，然后轉(zhuǎn)入裝置中進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果表明裝置的最適發(fā)酵溫度與腸道相近為37℃，發(fā)酵成熟時(shí)間為20h，能提供有效的厭氧環(huán)境，對(duì)以雙歧桿菌為代表的腸道厭氧菌富集效果高達(dá)270倍，能夠很好的模擬腸道的發(fā)酵狀態(tài)。
　?、茷榱双@得最適發(fā)酵培養(yǎng)基，進(jìn)行了一系列的碳氮源篩選試驗(yàn)、pH試驗(yàn)、單因素試驗(yàn)、梯度爬坡試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)。通過在培養(yǎng)基中添加雙歧桿菌促生長(zhǎng)劑，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)

3、基進(jìn)行優(yōu)化，得到了一種能夠使最終發(fā)酵產(chǎn)物中雙歧桿菌等益生菌的含量最高，而大腸桿菌等條件致病菌含量最低的培養(yǎng)基配方，為后面發(fā)酵制備復(fù)合微生態(tài)制劑做準(zhǔn)備。
　?、菫榱四軌蚍奖銠z測(cè)糞樣中的菌群結(jié)構(gòu)變化，設(shè)計(jì)了一種基于ERIC-PCR DNA指紋圖譜技術(shù)的菌群結(jié)構(gòu)檢測(cè)方法。首先優(yōu)化出適合兔糞微生物的ERIC-PCR反應(yīng)體系；然后通過選擇性培養(yǎng)基平板分離出糞樣中雙歧桿菌和大腸桿菌，提取基因組作ERIC-PCR分析，確定兔糞微生物基因指紋圖譜

4、中450 bp處為雙歧桿菌的特征條帶，1300與4000 bp處為大腸桿菌特征條帶，測(cè)定這3條條帶的亮度信息即可分析兩種菌的含量比例；最后經(jīng)發(fā)酵驗(yàn)證，圖譜中的相應(yīng)條帶亮度變化趨勢(shì)與平板計(jì)數(shù)所測(cè)結(jié)果相一致（相對(duì)亮度R與相對(duì)菌落數(shù)lg cfu的相關(guān)系數(shù)為0.9676），證明該檢測(cè)方法較為可靠。
　?、葹榱蓑?yàn)證所設(shè)計(jì)和制備的復(fù)合微生態(tài)制劑的益生效果，開展了初步的動(dòng)物試驗(yàn)，結(jié)果表明飼喂了復(fù)合微生態(tài)制劑的肉兔生長(zhǎng)性能顯著提高，與空白對(duì)照組相