C亞型SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴適應(yīng)性感染及變異分析.pdf

1、目前,以C亞型為主的HIV-1仍然在世界上廣泛流行,迫切需要研制出安全有效的艾滋病疫苗,進(jìn)而需要合適的艾滋病動物模型對疫苗進(jìn)行評價(jià)。C亞型SHIV和相應(yīng)非人靈長類模型是研究HIV-1感染和發(fā)病機(jī)制及評價(jià)以C亞型env區(qū)為靶點(diǎn)的候選疫苗功效的有效工具。
　　 為了建立合適的C亞型SHIV動物模型進(jìn)行候選疫苗評價(jià),本研究選擇了R.M.Ruprecht教授構(gòu)建的SHIV-1157ipd3N4,這株SHIV編碼HIV-1 C亞型env基

2、因,具有高度復(fù)制能力和單一CCR5輔助受體嗜性,能夠粘膜途徑感染恒河猴并誘發(fā)AIDS類似癥狀,而且感染猴緩慢的疾病進(jìn)程與人類感染HIV-1相似。本研究首先制備了SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株,發(fā)現(xiàn)其序列與SHIV-1157ipd3N4克隆株的相似度為99％。隨后,為了向后續(xù)動物模型接種劑量提供參考,又對SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株和印度恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株進(jìn)行了細(xì)胞水平評價(jià),結(jié)果前者病毒濃度為500

3、TCID50/ml,而后者為1000TCID50/ml。
　　 模擬血液傳播和性傳播方式建立SHIV-1157ipd3N4/中國恒河猴模型能夠反映艾滋病的傳播方式,本研究分別應(yīng)用SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株靜脈和直腸途徑感染中國恒河猴,SHIV-1157ipd3N4印度恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株陰道途徑感染中國恒河猴。同時(shí)為了更好的反映HIV在人群中自然傳播方式,直腸和陰道途徑模型使用了小劑量多次的感染方式。結(jié)果SH

4、IV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株能夠通過靜脈和直腸途徑成功感染中國恒河猴,而SHIV-1157ipd3N4印度恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株也成功地通過陰道途徑感染中國恒河猴,建立了三種途徑的SHIV-1157ipd3N4/中國恒河猴模型。
　　 隨后,本研究比較了不同感染途徑動物模型間的生物學(xué)特性、易感性和發(fā)病規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種途徑建立的SHIV-1157ipd3N4/中國恒河猴模型生物學(xué)特性存在差異。血漿病毒RNA載量方面,

5、靜脈組感染猴在21d時(shí)出現(xiàn)峰值后迅速下降進(jìn)入平臺期,而直腸組和陰道組感染猴血漿病毒RNA載量陽轉(zhuǎn)時(shí)間和峰值時(shí)間各不相同,部分感染猴的峰值不明顯,全部小劑量感染結(jié)束后逐漸進(jìn)入平臺期；外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值方面,靜脈組感染猴21d時(shí)均出現(xiàn)下降,隨后迅速恢復(fù)正常,而直腸組和陰道組感染猴的比值在小劑量多次感染過程中呈現(xiàn)多次小幅度波動,部分猴出現(xiàn)明顯下降過程,三組感染猴的比值隨著感染時(shí)間延長總體上逐漸下降；靜脈組和直腸組在整個(gè)感染

6、過程中外周血CD4+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)逐漸上升而陰道組基本保持穩(wěn)定；三組感染猴血漿結(jié)合抗體滴度穩(wěn)定上升,后期靜脈組明顯高于直腸組和陰道組。中國恒河猴三種途徑對SHIV-1157ipd3N4的易感性不同,靜脈途徑接種50 TCID50和5 TCID50SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株能夠成功感染,而0.5TCID50和0.05TCID50未感染。直腸和陰道途徑分別小劑量接種13次和11次后使實(shí)驗(yàn)猴全部感染。至感染后49w止

7、,所有感染猴都未出現(xiàn)明顯類似艾滋病的臨床癥狀。
　　 另外,為了揭示艾滋病病毒的變異規(guī)律,本研究又進(jìn)一步對SHIV-1157ipd3N4經(jīng)不同途徑感染中國恒河猴后的變異趨勢進(jìn)行了探索。發(fā)現(xiàn)短期內(nèi)從感染猴血漿中擴(kuò)增出的gp120堿基和氨基酸序列只存在少數(shù)位點(diǎn)的改變,沒有N糖基化位點(diǎn)的變化,也沒有出現(xiàn)明顯變異趨勢。
　　 在制備病毒株的過程中,為了證明HIV-1 p24 ELISA試劑盒檢測SIV p27抗原結(jié)果的可靠性,本

8、研究比較了HIV-1 p24和SIV p27兩種ELISA試劑盒對病毒液和血漿中SIV p27抗原檢測結(jié)果。結(jié)果顯示HIV-1 p24和SIV p27兩種ELISA試劑盒檢測SIV p27抗原的靈敏度分別是150 pg/mL和62.5 pg/mL；兩種試劑盒檢測病毒液和血漿中SIV p27抗原的定性結(jié)果一致；定量結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析得出病毒液的直線回歸決定系數(shù)R2=0.857,直線相關(guān)系數(shù)r=0.926,P<0.01；血漿的直線回歸決定系數(shù)R

9、2=0.512,直線相關(guān)系數(shù)r=0.716,P<0.05。
　　 綜上所述,本課題首先制備了SHIV-1157ipd3N4中國恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株,然后模擬人類自然感染HIV方式和三種主要感染途徑分別建立了靜脈、直腸和陰道途徑SHIV-1157ipd3N4/中國恒河猴模型,并比較不同感染途徑動物模型間的生物學(xué)特性、易感染性和發(fā)病規(guī)律,進(jìn)一步對病毒經(jīng)不同途徑感染中國恒河猴后的變異趨勢進(jìn)行了探索,另外比較了HIV-1 p24和SIV p