連翹葉和高山蓍地上部分化學(xué)成分及連翹葉茶潤(rùn)腸通便藥理活性研究.pdf

1、第一部分：連翹葉的化學(xué)成分研究
　　連翹(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)為木犀科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)落葉灌木。其果實(shí)為《中華人民共和國(guó)藥典》收載常用中藥連翹，按采收時(shí)節(jié)不同，分為“青翹”和“老翹”。性平、味甘、苦，具有清熱解毒，消腫散結(jié)之功效?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，連翹具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝、解熱、利尿、止嘔之功效，為雙黃連口服液、雙黃連粉針劑、清熱解毒口服液、連草解熱口

2、服液、銀翹解毒沖劑等中藥制劑的主要原料[1]。故現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用其治療急性呼吸道感染、皮膚化膿性感染、急性腎炎等病癥。連翹中含有多種化學(xué)成分，如三萜類(lèi)、木脂素類(lèi)等，其中三萜類(lèi)成分中的齊墩果酸和熊果酸為抗肝損傷的有效成分。而作為藥材副產(chǎn)物的連翹葉量多且易得，在我國(guó)河北、陜西和河南等地常作為保健茶使用，人們認(rèn)為連翹葉有較好的保健價(jià)值。近些年化學(xué)研究證明[2]，連翹葉與常用藥材連翹果實(shí)的化學(xué)成分有較好的一致性，而且連翹葉中有的生物活性成分如連翹苷

3、、連翹酯苷的含量遠(yuǎn)高于連翹果實(shí)；同時(shí)已有藥理研究證實(shí)[3-7]，連翹葉提取物有較好的抗氧化和降血脂作用，連翹酯苷有較好的抗病毒和抗氧化作用，連翹苷有較好的抗菌、降血脂和減肥作用。目前，國(guó)內(nèi)一些中藥生產(chǎn)廠(chǎng)家采購(gòu)連翹葉進(jìn)行提取以代替連翹使用。連翹葉與連翹活性成分統(tǒng)一性如何，這樣做是否合理，會(huì)不會(huì)降低藥效，還有待商榷。河北省井陘縣洞陽(yáng)坡由于獨(dú)特的地理環(huán)境和氣候特點(diǎn)，種植有豐富的野生連翹資源，人們?cè)诓杉麑?shí)的過(guò)程中將大量的連翹葉丟棄。為了進(jìn)一步

4、了解連翹葉的化學(xué)成分，使其得到正確的開(kāi)發(fā)和利用，我們對(duì)取自洞陽(yáng)坡的連翹葉的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離分析，以便更好的開(kāi)發(fā)和利用連翹葉資源。
　　目的：本研究旨在以連翹葉為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)提取分離研究，利用各種分離手段和新技術(shù)對(duì)其中的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，尋找新的化學(xué)成分。對(duì)得到的單體化合物，采用UV、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY、NOESY等現(xiàn)代波譜鑒定技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，豐富連翹屬植物的化

5、合物庫(kù)，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：將自然干燥的連翹(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)葉4.4Kg揉碎后，室溫下用95％工業(yè)乙醇冷浸一周，重復(fù)三次。將所得浸出液濾出合并后減壓濃縮至膏狀，即得到連翹葉粗提物浸膏2359.6g。將浸膏懸浮在飽和食鹽水中溶解，依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓低溫濃縮，得到相應(yīng)萃取物膏狀物。膏狀物揮盡溶劑后，稱(chēng)重，待分離純化。

6、其中石油醚和二氯甲烷萃取部分分別經(jīng)薄層色譜檢識(shí)選擇適宜的洗脫溶劑后，進(jìn)一步用硅膠柱色譜、制備薄層色譜、葡聚糖凝膠柱色譜反復(fù)分離純化；正丁醇萃取部分進(jìn)行大孔樹(shù)脂柱色譜分離純化。分離得到的單體化合物用UV、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY、NOESY等波譜學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)測(cè)定的譜圖數(shù)據(jù)分析確定化合物的結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：對(duì)連翹葉的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)提取分離共得到14個(gè)單體化合物，現(xiàn)已確定了其中10個(gè)

7、的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其余化合物的結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步確證。其中5個(gè)三萜類(lèi)化合物，2個(gè)木脂素類(lèi)化合物，1個(gè)甾體類(lèi)化合物，1個(gè)黃酮類(lèi)化合物，1個(gè)其他類(lèi)化合物，這些化合物分別為3β-acetoxy-11-en-olean-28,13-olide(1),3β-acetoxyurs-12-en-28-oicacid(2),β-sitosterol(3),3β-acetoxyolean-12-en-28-oicacid(5),betulin(6),forsyth

8、enin(7),(+)phillygenin(8),alphitolicacid(10),phillyrin(13)和rutin(14)。
　　結(jié)論：本文對(duì)連翹葉的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)提取分離研究，采用了硅膠柱色譜、制備薄層色譜、葡聚糖凝膠色譜、大孔樹(shù)脂柱色譜等多種分離手段，提取分離方法選擇較恰當(dāng)，總共分離得到14個(gè)單體化合物，通過(guò)多種波譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確定了其中10個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中4個(gè)三萜類(lèi)化合物3β-acetoxy

9、-11-en-olean-28,13-olide(1),3β-acetoxyurs-12-en-28-oicacid(2),3β-acetoxyolean-12-en-28-oicacid(5),betulin(6)為首次從連翹屬植物中分離得到。
　　第二部分：高山蓍地上部分的化學(xué)成分研究
　　高山蓍(AchilleaalpinaLinn)為菊科(Asteraceae)蓍屬(Achillea)多年生草本植物，國(guó)內(nèi)主要分布于東

10、北、內(nèi)蒙古、河北、山西、寧夏、甘肅東部等省區(qū)。常見(jiàn)于山坡草地、灌叢間及林緣。國(guó)外主要分布于朝鮮、日本、蒙古、俄羅斯東西伯利亞及遠(yuǎn)東地區(qū)。蓍屬植物因以阿基里斯(Achilles)命名而帶有一些神話(huà)色彩，常用于治療創(chuàng)傷[1,2]。該屬植物的地上部分，主要用于消炎、解痙、止血、助消化和利膽[3-6]。其中揮發(fā)油成分顯示出抗菌和抗真菌的特性[7-9]。比如，A.clavennae及其他相關(guān)物種在克羅地亞作為傳統(tǒng)藥來(lái)治療痢疾、腹痛、發(fā)燒、普通感冒

11、、流感和呼吸道疾病等[10]。在該屬植物中，對(duì)A.millefoliumL.(Yarrow)的研究最多，常作為驅(qū)蠕蟲(chóng)藥、抗炎藥、收斂藥、利膽劑、抗痙攣藥、抗病毒藥、利尿藥、鎮(zhèn)痛藥及止血藥等應(yīng)用于臨床[11-13]。
　　目的：本研究旨在以資源豐富且易得的高山蓍地上部分為研究對(duì)象，利用各種分離手段和新技術(shù)對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)提取分離，對(duì)得到的單體化合物，采用UV、1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HSQC、1H-1HCOSY、NOES

12、Y、等現(xiàn)代波譜鑒定技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：將自然干燥的高山蓍(AchilleaalpinaLinn)地上部分約8.9Kg剪成小段，室溫下用95%工業(yè)乙醇冷浸半月，將所得浸出液濾出合并后減壓濃縮至膏狀。第二次室溫下用95%工業(yè)乙醇冷浸一周，將所得浸出液濾出合并后減壓濃縮至膏狀，第三次用95%工業(yè)乙醇回流提取2h，保持微沸狀態(tài)，提取直至回流提取液近無(wú)色，將所得浸出液濾出合并后減壓濃縮至膏狀，即得到

13、高山蓍地上部分粗提物浸膏1253.5g。將浸膏懸浮在飽和食鹽水中，依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。二氯甲烷萃取部分經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)分離純化，正丁醇萃取部分進(jìn)行大孔樹(shù)脂柱色譜、硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜分離純化。分離得到的單體化合物用UV、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY、NOESY等波譜學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)測(cè)定的譜圖數(shù)據(jù)分析確定化合物的結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：通過(guò)系統(tǒng)提

14、取分離從高山蓍地上部分中共得到24個(gè)化合物，確定了其中15個(gè)的化學(xué)結(jié)構(gòu)，15個(gè)中有一個(gè)為混合物，其余化合物的結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步確證。鑒定結(jié)果：1個(gè)木脂素類(lèi)化合物，1個(gè)香豆素類(lèi)化合物，1個(gè)對(duì)苯醌類(lèi)化合物，1個(gè)長(zhǎng)鏈脂肪醛，2個(gè)長(zhǎng)鏈脂肪醇，10個(gè)黃酮類(lèi)化合物。15個(gè)化合物分別為(-)-sesamin(1),artemitin(2),fattyalcohol(3),eupatorin(5),aliphaticaldehyde(6),2,6-dime

15、thoxyquinone(7),fattyalcohol(8),eleutherosideB1(10),luteolin-7-o-glucoside(11),isoorientin(12),chrysoeriol-7-o-glucoside和tricin-7-o-glucoside(16),apigenin-7-o-glucoside(17),luteolin-4?-o-glucoside(18),isorhamnetin-3-o-ru

16、tinoside(20),chrysoeriol-7-o-rutinoside(22)。
　　結(jié)論：本文對(duì)高山蓍地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)提取分離研究，采用了硅膠柱色譜、制備薄層色譜、葡聚糖凝膠柱色譜、大孔樹(shù)脂柱色譜等多種分離手段，分離得到24個(gè)化合物，通過(guò)多種波譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確定了其中15個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中aliphaticaldehyde(6),2,6-dimethoxyquinone(7),eleuthero

17、sideB1(10)為首次從蓍屬中分離得到；(-)-sesamin(1),artemitin(2),fattyalcohol(3),eupatorin(5),fattyalcohol(8),luteolin-7-o-glucoside(11),isoorientin(12),chrysoeriol-7-o-glucoside和tricin-7-o-glucoside(16),apigenin-7-o-glucoside(17),lute

18、olin-4?-o-glucoside(18),isorhamnetin-3-o-rutinoside(20),chrysoeriol-7-o-rutinoside(22)為首次從高山蓍植物中分離得到。
　　第三部分：連翹葉茶潤(rùn)腸通便藥理活性的研究
　　連翹(Forsythiasuspense)為木犀科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)植物。關(guān)于連翹茶的使用，已有多年的歷史。在河北省武安和山西省平定兩地的長(zhǎng)壽村

19、里，居民有飲用以連翹葉做成茶制品的習(xí)俗，顯示其可能具有養(yǎng)生的功效。近年研究表明連翹葉茶提取物具有多種藥理活性，如抗氧化、保肝、抗衰老、保護(hù)心臟等。我們發(fā)現(xiàn)河北省井陘縣居民飲用當(dāng)?shù)氐倪B翹葉制成的茶制品，具有一定的潤(rùn)腸通便的效果。為了驗(yàn)證這一功效，本實(shí)驗(yàn)選取河北省井陘縣洞陽(yáng)坡加工的連翹葉茶，進(jìn)行潤(rùn)腸通便方面的藥理實(shí)驗(yàn)研究，以便更好的開(kāi)發(fā)和利用當(dāng)?shù)氐倪B翹資源。
　　目的：本研究旨在以河北省井陘縣的連翹葉做成的茶制品為研究對(duì)象，觀察其潤(rùn)腸

20、通便作用，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：制備連翹葉茶水提取物，配成各劑量組。實(shí)驗(yàn)設(shè)連翹葉茶水提取物3個(gè)計(jì)量組，分別為0.5、1.5和3.0g/Kg·bw，連翹苷2個(gè)計(jì)量組，分別為9.0和15.0mg/Kg·bw，麻仁滋脾丸6.0g/Kg·bw組作為陽(yáng)性對(duì)照組。同時(shí)設(shè)蒸餾水空白對(duì)照組和復(fù)方地芬諾酯模型對(duì)照組，分別進(jìn)行小鼠排便實(shí)驗(yàn)和小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)。小鼠排便實(shí)驗(yàn)觀察記錄每只小鼠自灌胃墨汁后至首次排出黑便所需時(shí)間，以及6h內(nèi)小鼠排便粒數(shù)和糞

21、便重量。小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)觀察記錄小腸總長(zhǎng)度和墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度。
　　結(jié)果：給予連翹葉茶水提取物后，小鼠體重沒(méi)有表現(xiàn)出差異（P＞0.1），表明連翹葉茶水提取物對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響。模型組和空白組比較，首粒黑便時(shí)間縮短（P﹤0.001），糞便粒數(shù)增加（P﹤0.01），表明造模成功。連翹葉茶水提取物各給藥組與模型組比較，連翹葉茶水提取物各劑量組首便時(shí)間無(wú)明顯差異，各劑量組糞便粒數(shù)均增加，連翹葉茶水提取物0.5g/Kg·bw、1.5g/Kg·bw

22、糞便重量增加。麻仁滋脾丸組與模型組比較，首粒黑便時(shí)間縮短，糞便粒數(shù)無(wú)明顯差異，糞便重量增加。連翹苷各劑量組與模型組比較，三項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯差異。模型組和空白組比較，墨汁推進(jìn)率明顯減?。≒﹤0.01），說(shuō)明造模成功。連翹葉茶水提取物各劑量組與模型組比較，墨汁推進(jìn)率明顯增加。麻仁滋脾丸組與模型組比較，墨汁推進(jìn)率也明顯增加（P﹤0.001）。連翹苷各劑量組沒(méi)有表現(xiàn)出差異。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的連翹葉茶水提取物后，對(duì)