魚眼草地上部分化學(xué)成分研究.pdf

1、魚眼草(Dichrocephala integrifolia)為菊科(Compositae)魚眼草屬(Dichrocephala)植物，分布于亞洲、非洲及大洋洲熱帶地區(qū)，具有很高藥用價值。該屬包括魚眼草(Dichrocephala integrifolia)，小魚眼草(Dichrocephala benthamii)、菊葉魚眼草(Dichrocephala chrysanthemifolia)，魚眼菊(Dichrocephala bic

2、olor)及寬葉魚眼草(Dichrocephala latifolia)這五種，其中前三種植物據(jù)《中國植物志》記載是分布于我國的品種。早在《滇南本草》中有記載，藥材來源為菊科植物小魚眼草和菊葉魚眼草的全草，名為魚眼草。該味藥材，味苦，性寒。用于治瘧疾，痢疾，腹瀉，口瘡，瘡瘍，婦女白帶，肝炎等。在現(xiàn)代《云南中草藥》、《貴州藥植目錄》、《云南中醫(yī)驗方》等醫(yī)藥書中也有了進(jìn)一步的記載。
　　目前，該屬植物中已發(fā)現(xiàn)了萜類、揮發(fā)油、黃酮類、甾

3、體類等化學(xué)成分，對這些化學(xué)成分的一部分還進(jìn)行了藥理活性研究。為了促進(jìn)該屬植物的綜合開發(fā)利用，尋找更多的活性成分。本課題以魚眼草地上部分為研究對象，對其石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化，結(jié)構(gòu)確認(rèn)以及藥理活性篩選。
　　目的:本研究旨在以魚眼草地上部分為研究對象，利用硅膠柱色譜、制備薄層色譜、高效液相制備色譜以及重結(jié)晶等分離純化技術(shù)對其進(jìn)行系統(tǒng)研究，從而建立行之有效的單體化合物分離純化方法，尋找新

4、的化學(xué)成分。再應(yīng)用UV、IR、MS以及一維和二維核磁圖譜(1H-NMR、13C-NMR、1H-iH COSY、HMQC、HMBC、NOESY)等現(xiàn)代技術(shù)完成單體化合物分子或結(jié)構(gòu)簡單的兩組分混合物的結(jié)構(gòu)鑒定。同時還可以通過活性篩選，得活性成分，用于進(jìn)一步開發(fā)利用。
　　方法:自然干燥的魚眼草地上部分(Dichrocephala integrifolia)6 Kg，用95％工業(yè)乙醇回流提取3次后，分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁

5、醇萃取，濃縮得四個部分。將該四部分經(jīng)硅膠柱色譜，制備薄層色譜，制備液相色譜、葡聚糖柱、大孔吸附樹脂柱、重結(jié)晶以及其它分離純化方法進(jìn)一步得到單體化合物。所得化合物應(yīng)用UV、IR、MS、HRMS-ESI、一維和二維核磁技術(shù)進(jìn)行檢測，根據(jù)得到的圖譜及數(shù)據(jù)分析推測或與參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比來確定化合物的平面結(jié)構(gòu)和立體結(jié)構(gòu)。最后還運(yùn)用MTT比色法測定了其中幾個化合物對三個人肝癌細(xì)胞系(Bel-7402，SMMC-7721，Hep G2)存活率的影響，得

6、到相關(guān)化合物抗腫瘤活性的依據(jù)。
　　實驗過程中，所用檢識薄層硅膠和制備薄層硅膠都是GF254，黏合劑均是混勻的0.5-0.7％羧甲基纖維素鈉溶液，薄層板都通過人工鋪制而成。薄層檢識常用分析方法有254 nm、365 nm紫外分析儀下觀察暗斑和熒光;10％硫酸乙醇，香草醛濃硫酸，磷鉬酸，碘蒸氣顯色后觀察。
　　初步分析化合物純度采用的方法是:液相色譜下出峰單一;薄層檢識在三個及三個以上展開劑系統(tǒng)下化合物樣品斑點單一，顏色單一。

7、
　　結(jié)果:通過對植物魚眼草（Dichrocephala integrifolia）地上部分系統(tǒng)分離，從中得到37個單體化合物，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。由于時間的限制僅確定了其中26個化合物的結(jié)構(gòu)。化合物類型有萜類、脂肪酸、甾醇及其苷類、生物堿類、苯丙素類以及揮發(fā)油。結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果:26個化合物分別是stigmasta-7,22-dien-3-ol(1),n-tetradecoic acid(2),dichrocephol C(3),

8、 dichrocephol B(4),3-O-[6'-O-palmitoyl-β-D-glucosyl] spinasta7,22-dine(8), ergosta-6,22-diene-3,5,8-triol(12),3'-O-methyleupatorin(13),methyl pheophorbide b(14), N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylala-ninate(15), aur

9、antiamide acetate(16), isobutyl phthalate(17), n-butyl phtha-late(18), methyl phaeophorbide a(20),16-hydroxycleroda-3,13-dien-15,16-olide-18-oicacid(22), eudesm-11-ene-4α,7β,9β-trio1(23), stigmasta-7,22-dien-3β-O-β-D-glu

10、cosi de(24),1,8-terpenediol(26),quercetin-3-O-glucos-ide(27),(1R,3S,4R,5S)-3,4-bis[[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-1,5-dihydroxy-cyclohexanecarboxylic acid(28),(1R,3R,4S,5R)-3,4-bis[[(2E)-3-(3,4-dihyd

11、roxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl] oxy]-1,5-dihydroxy-cyclohexanecarboxylic acid(29), quercetin-3-O-rutinoside(31),kaempferol3-β-D-glucoside(32), kaempferol-3-O-rutinoside(33),3-(β-D-glucopyranosyloxy)-2-hydroxy-olean-12-ene-

12、23,28-dioicacid,28-(glucopyr-anosyl-(1→2)-xylopyranosyl-(1→4)-glucopyranosyl) ester(35),2-hydroxy-olean-12-ene-23,28-dioicacid-3-O-β-D-glucopyranoside(36),3-(β-D-glucop-yranosyloxy)-16-methanoyl-olean-12-ene-28-oicacid,2

13、8-(glucopyranosyl-(1→4)-2-ethanoyl-xylopyranosyl-(1→4)-glucopyranosyl) ester(37)。活性篩選結(jié)果，化合物15-16及化合物23具有抑制Bel-7402， SMMC-7721和Hep G2三個人肝癌細(xì)胞株增殖的活性。
　　結(jié)論:本文對植物魚眼草（Dichrocephala integrifolia）地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，實驗結(jié)果表明，試驗中運(yùn)用

14、的溶劑和方法是可行的。為了分離、純化魚眼草地上部分化學(xué)成分，利用了液液萃取，硅膠柱色譜，制備薄層色譜，制備液相色譜、葡聚糖柱、大孔吸附樹脂柱、重結(jié)晶以及其它分離純化方法，共得到37個化合物。通過多種波譜學(xué)手段已確定了26個化合物的結(jié)構(gòu)。其中，化合物23、35和37是新化合物，化合物2，8，12-16，22，24，26，36首次從該屬植物中得到，化合物3-4，18，28-29，31，33首次從魚眼草中分離得到，化合物22立體構(gòu)型確定后有可