CA-4的結(jié)構(gòu)修飾、抗腫瘤活性及丹參酮類化合物抗炎活性研究.pdf

1、作為一種微管蛋白抑制劑，CombretastatinA-4(CA-4)，是Pettit等人從南非植物Combretumcaffrum中分離出來的一種具有抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物。與傳統(tǒng)的直接作用于癌細胞的抗腫瘤藥物不同，CA-4能夠靶向地破壞腫瘤的脈管系統(tǒng)，使腫瘤細胞缺乏營養(yǎng)供應而“餓死”;CA-4的結(jié)構(gòu)與秋水仙堿相似，能夠抑制微管聚合和有絲分裂。其他微管抑制劑對腫瘤血管的破壞因為大都發(fā)生在藥物的最大耐受劑量附近而在臨床應用中受到限制。相比

2、之下，CA-4在十分之一的最大耐受劑量時就具有抗腫瘤活性，具有較好的臨床應用前景。CA-4結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易轉(zhuǎn)化為活性極低的反式結(jié)構(gòu)，溶解性差，從而限制了其臨床應用。由于CA-4具有結(jié)構(gòu)簡單，抗癌活性強，不易產(chǎn)生耐藥等諸多優(yōu)點，便于結(jié)構(gòu)改造和修飾，因此CA-4的結(jié)構(gòu)改造成為研究者近年研究的焦點之一。
　　近年來藥學工作者們不斷對CA-4進行結(jié)構(gòu)修飾和改造以期獲得抗癌活性好、有較好溶解性和穩(wěn)定性的CA-4衍生物。本課題把對CA-4的結(jié)構(gòu)

3、改造重點放在3'-OH的取代上，期望得到抗腫瘤活性好、更加穩(wěn)定的CA-4前藥，以便進行CA-4衍生物口服制劑新藥的研發(fā)。因此我們設(shè)計并合成了11種新的CA-4衍生物，并對它們的抗腫瘤活性和機制進行了初步研究。通過體外細胞毒試驗，用乳腺癌細胞株MCF-7、MDA-MB-231、白血病細胞株K562和肺癌細胞株A549對合成的CA-4衍生物進行體外抗腫瘤活性初篩，實驗結(jié)果表明:合成的CA-4衍生物都具有很好的抗腫瘤活性，其中CA-4E活性最

4、高。選擇活性最好的化合物CA-4E進行了對腫瘤細胞周期影響實驗和凋亡實驗。周期結(jié)果表明CA-4E阻滯乳腺癌細胞MCF-7于G2/M期并伴有濃度依賴性，與先導化合物CA-4一致但作用更強。凋亡結(jié)果表明CA-4E能誘導腫瘤細胞凋亡并伴有濃度依賴性。CA-4E作為CA-4的結(jié)構(gòu)改造類似物，具有更好的抗腫瘤活性，解決了CA-4不穩(wěn)定的問題，值得進一步研究和探索。
　　白花丹參(SalviamiltiorrhizaBungevar.alba

5、C.YWuetH.WLi)，是丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)的變種，主產(chǎn)于山東萊蕪、泰安等地區(qū)，臨床上可作為丹參使用，具有治療心血管疾病的作用，并且對血栓閉塞性脈管炎(TAO)的治療有很好的療效，在當?shù)貞闷渲委烼AO已有近百年的歷史。相關(guān)文獻已報道過白花丹參與丹參的化學成分大致相同，主要成分都是脂溶性的丹參酮類化合物和水溶性的酚酸類化合物。
　　白花丹參對血栓閉塞性脈管炎的治療有著獨特的療效，但是目前白花

6、丹參治療TAO的活性成分及其抗炎機制卻尚未清楚。因此，本課題在對其活性成分進行研究的基礎(chǔ)上，選擇從白花丹參中得到的三個丹參酮類化合物并對其與TAO有關(guān)的抗炎機制進行探討，從抗炎的角度為丹參酮類化合物治療TAO提供理論依據(jù)。
　　本課題研究了丹參酮Ⅰ，隱丹參酮和15，16-二氫丹參酮Ⅰ三種丹參酮類化合物對腫瘤壞死因子(TNF-α)誘導的人主動脈內(nèi)皮細胞(HAECs)炎癥模型的影響。實驗方法如下:RT-PCR法定量檢測白介素-6(IL

7、-6)，核因子κB(NF-κB)，細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)的mRNA表達水平;ELISA法檢測細胞上清中IL-6的變化;免疫細胞化學檢測ICAM-1的蛋白水平;巨噬細胞U937與HAECs細胞黏附實驗檢測三種丹參酮類化合物對這兩種細胞粘附的影響;DCFH-DA檢測細胞內(nèi)ROS表達水平;WesternBlot法檢測ICAM-1、VCAM-1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-κB的蛋白表