丹參酮類化合物放射增敏作用的研究.pdf

1、目的：丹參是臨床最常用的活血化瘀中藥，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為丹參具有擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量、防止心肌缺血和心肌梗死等心血管作用，并能治療肝癌、胃癌、白血病等多種疾病。丹參酮可能通過抑制腫瘤細胞增殖、促進凋亡以及促進分化等機制發(fā)揮抗腫瘤作用。本文就丹參酮化合物（丹參酮Ⅱ A、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮、隱丹參酮）對宮頸癌Hela細胞的細胞毒性及放射增敏作用進行研究，探討化合物結(jié)構(gòu)與細胞毒性的關(guān)系及可能的作用機制。對丹參酮ⅡA化合物進行結(jié)構(gòu)修飾與改造

2、，檢測細胞毒活性，為發(fā)現(xiàn)低毒、高效的腫瘤放射治療增敏藥物提供依據(jù)。
　　 方法：MTT比色法檢測不同濃度的丹參酮化合物，分別在24h、48h、72h對Hela細胞增殖的抑制作用?？寺⌒纬蓪嶒灧治觯喟袉螕魯M合模型方程計算放射增敏比，評價增敏效果。流式細胞儀（FCM）檢測隱丹參酮及二氫丹參酮對Hela細胞周期和凋亡的影響。免疫蛋白印跡（Western blot）法檢測E6、p53和p21蛋白的表達。建立小鼠H22肝癌模型。照后22

3、d處死小鼠，剝瘤稱重，計算抑瘤率和增敏系數(shù)（EF）。通過曼尼希反應(yīng)，對細胞毒活性相對不強的丹參酮Ⅱ A進行結(jié)構(gòu)修飾，引入甘氨酸鈉鹽，檢測丹參酮Ⅱ A衍生物的細胞毒活性。
　　 結(jié)果：不同濃度的（0.5-16μg/ml）丹參酮Ⅱ A、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮、隱丹參酮對Hela細胞毒性均有明顯劑量和時間依賴性，其作用24h的IC50值分別為：24.1μg/ml、20.1μg/ml、8.4μg/ml、17.8μg/ml；作用48h的IC

4、50值分別為：7.97μg/ml、11.1μg/ml、2.2μg/ml、8.2μg/ml；作用72h的IC50值分別為：4.6μg/ml、3.5μg/ml、1.5μg/ml、8.6μg/ml。隱丹參酮和二氫丹參酮對Hela細胞具有較強的放射增敏作用，細胞克隆形成法得兩化合物IC20時增敏比分別為1.4和1.35，隱丹參酮和二氫丹參酮均使Hela細胞的細胞周期構(gòu)成發(fā)生明顯的變化，并誘導(dǎo)細胞凋亡。Westernblot表明，隱丹參酮作用He

5、la細胞后HPV E6的蛋白水平表達逐漸降低，p53和p21的蛋白水平表達逐漸升高。體內(nèi)試驗表明：不同劑量給藥后均能抑制實體腫瘤生長，但中劑量給藥放射增敏效果比較顯著。丹參酮Ⅱ A衍生物對Hela細胞的生長抑制作用與給藥濃度和時間密切相關(guān)，且濃度在1μg/ml時，作用24和48h的抑制腫瘤細胞增殖能力最強。
　　 結(jié)論：丹參酮化合物（丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮、隱丹參酮）對宮頸癌Hela細胞均具有增殖抑制作用，其中二氫丹參

6、酮對宮頸癌細胞Hela的細胞毒性最強。A環(huán)為芳香環(huán)與D環(huán)呋喃環(huán)的結(jié)構(gòu)差別使其對Hela細胞增殖的抑制作用有明顯的差異。隱丹參酮和二氫丹參酮對宮頸癌Hela細胞均有較好的細胞毒性和放射增敏作用，對肝癌移植的荷瘤小鼠，具有抑制和延遲腫瘤生長的作用。其增敏機制可能是使Hela細胞生長停滯在G0/G1期并誘導(dǎo)細胞凋亡，使S期細胞比例降低，抑制HPV E6的蛋白的表達，使p53功能恢復(fù)啟動凋亡，進而起到殺傷腫瘤細胞的作用。丹參酮ⅡA采用曼尼希反應(yīng)