黃酮類化合物對人卵巢癌細胞株SKOV3的放射增敏作用及其機制研究.pdf

1、放療，即利用電離輻射如X射線、Y射線或電子束等殺傷腫瘤細胞，是目前治療惡性腫瘤的主要手段之一。但是由于腫瘤細胞的生物學特性及局部微環(huán)境等的影響，導致某些腫瘤細胞對射線的敏感性較低，射線不能有效地殺傷腫瘤細胞，因而放療的效果較差。為了改善放療效果，臨床上將某些藥物與放療聯(lián)合使用，稱之為放射增敏劑(radiosensitizingagents)，其與放療聯(lián)用，通過選擇性地殺傷乏氧腫瘤細胞、抑制放射損傷修復、調(diào)節(jié)細胞周期、誘導腫瘤細胞凋亡等，

2、來增強腫瘤細胞的放射敏感性，降低照射劑量，減少對正常細胞的損傷。
　　卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其患者死亡率居各類婦科腫瘤的首位。卵巢癌依病期不同，可采用手術、放療、化療或以上方式綜合治療。但在放療中，由于各類卵巢癌細胞對射線的敏感性不同，且癌細胞致死所需放射量和正常組織的耐受量差異很小，故有放療效果欠佳或?qū)φ＝M織的損傷較重等弊端，因此，有必要對放射增敏劑在卵巢癌放療中應用的可能性進行探討。
　　本實驗選用染料木黃酮

3、(Genistein，Gen)、槲皮素(Quercetin，Que)和白楊素(Chrysin，Chr)三種代表性的黃酮類化合物作為增敏藥物，以對放療不敏感的人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細胞株SKOV3作為卵巢癌的細胞模型，采用X射線照射，從提高腫瘤細胞放射敏感性的方法入手，并結合黃酮類化合物自身的藥理學特性，研究黃酮類化合物的放射增敏作用及其機制，并探討了黃酮類化合物作為放射增敏劑的可能性，以期為黃酮類化合物在放射增敏方面的進一步研究提供實

4、驗依據(jù)。具體內(nèi)容如下:
　　（一）黃酮類化合物對SKOV3細胞的毒性
　　采用MTT法篩選出三種黃酮類化合物對SKOV3細胞的無毒濃度范圍。結果表明，超出一定濃度范圍的染料木黃酮、槲皮素和白楊素作用于SKOV3細胞24，48，72 h后，與同時間點內(nèi)的正常對照組相比，SKOV3細胞存活率均顯著性下降(P＜0.05)，且呈現(xiàn)一定的濃度和時間依賴性(P＜0.05)。染料木黃酮、槲皮素和白楊素作用于SKOV3細胞72 h的無毒濃度

5、應分別小于31.12，15.30，20.77μ mol·L-1，說明染料木黃酮的細胞毒性相對較低。
　?。ǘS酮類化合物對SKOV3細胞的放射增敏作用
　　無毒濃度范圍內(nèi)的黃酮類化合物，即2.5～30μ mol·L-1Gen、1.25～15μ mol·L-1Que和1.25～20μ mol·L-1Chr，分別于照射前2h預作用于SKOV3細胞，X射線(2，4，6，8，10 Gy)單次照射后72 h，采用MTT法檢測放射增敏

6、作用。三種黃酮類化合物對SKOV3細胞的放射增敏比(SER)分別為1.37～2.06，1.20～1.80和1.23～1.83，三種黃酮類化合物的各藥物濃度組的SER值均有顯著性差異(P＜0.01)，放射生物學參數(shù)D0、Dq和N值均較單純放射組顯著性減小(P＜0.05)，且隨藥物濃度的增大，SER值增大(P＜0.01)，D0、Dq和N值減小(P＜0.05)。結果表明，一定濃度范圍內(nèi)的染料木黃酮、槲皮素和白楊素均對SKOV3細胞有放射增敏作

7、用，使SKOV3細胞的放射損傷修復能力降低，放射敏感性增強，且染料木黃酮的放射增敏作用相對較強。
　　（三）染料木黃酮對SKOV3細胞放射增敏機制的研究
　　5，10，20μmol·L-1Gen分別于照射前2h預作用于SKOV3細胞，X射線(2，4，6 Gy)單次照射后24，48 h，采用試劑盒檢測細胞內(nèi)ROS、MDA含量及T-AOC水平，采用PI單染法結合流式細胞儀檢測細胞周期分布，采用Hoechst33342單染法結合熒

8、光顯微鏡檢測細胞凋亡，采用RT-PCR及Western Blot檢測Bcl-2、Bax、Survivin、NF-κB mRNA及蛋白表達。
　　照射后24，48 h，單純加藥組、單純放射組以及加藥聯(lián)合放射組的SKOV3細胞內(nèi)ROS、MDA含量及細胞凋亡率均顯著性高于同時間點內(nèi)的正常對照組(P＜0.05)，加藥聯(lián)合放射組的ROS、MDA含量及細胞凋亡率比相同濃度單純加藥組或相同劑量單純放射組的顯著增加(P＜0.05)，且隨藥物濃度和

9、放射劑量的增大，ROS、MDA含量及細胞凋亡率相應增加(P＜0.05);與同時間點內(nèi)的正常對照組相比，單純放射組和加藥聯(lián)合放射組的T-AOC水平、G1期細胞比例顯著性降低(P＜0.05)，G2/M期細胞比例上升(P＜0.05)，且與放射劑量存在一定的相關性(P＜0.05)，但無藥物濃度依賴性(P＞0.05)。
　　照射后48 h，與正常對照組相比，6 Gy單純放射和20μ mol·L-1Gen+6Gy聯(lián)合作用均使SKOV3細胞的B

10、cl-2、Bax mRNA和NF-κB mRNA及蛋白表達顯著性上調(diào)，Bcl-2蛋白表達顯著性下調(diào)(P＜0.01)，且聯(lián)合作用組的Bax mRNA、NF-κB mRNA及蛋白表達水平顯著性高于單純放射組(P＜0.05)，Bcl-2蛋白表達水平顯著性低于單純放射組(P＜0.01);20μ mol·L-1Gen和20μ mol·L-1Gen+6 Gy聯(lián)合作用均使Bax蛋白表達高于正常對照組(P＜0.05)，且聯(lián)合作用組的Bax蛋白表達水平顯

11、著性高于20μ mol·L-1Gen組和單純放射組(P＜0.01);將各組之間的Bcl-2/Bax mRNA及蛋白表達比值進行比較，20μmol·L-1Gen、6 Gy單純放射和20μ mol·L-1Gen+6 Gy組的Bcl-2/Bax比值均較正常對照組減小(P＜0.05)，且聯(lián)合作用組顯著性小于20μ mol·L-1Gen組以及6 Gy單純放射組(P＜0.01);20μ mol·L-1Gen和6 Gy單純放射均使Survivin蛋白