黃酮類(lèi)化合物對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3的放射增敏作用及其機(jī)制研究.pdf

1、放療，即利用電離輻射如X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)或電子束等殺傷腫瘤細(xì)胞，是目前治療惡性腫瘤的主要手段之一。但是由于腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性及局部微環(huán)境等的影響，導(dǎo)致某些腫瘤細(xì)胞對(duì)射線(xiàn)的敏感性較低，射線(xiàn)不能有效地殺傷腫瘤細(xì)胞，因而放療的效果較差。為了改善放療效果，臨床上將某些藥物與放療聯(lián)合使用，稱(chēng)之為放射增敏劑(radiosensitizingagents)，其與放療聯(lián)用，通過(guò)選擇性地殺傷乏氧腫瘤細(xì)胞、抑制放射損傷修復(fù)、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等，

2、來(lái)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的放射敏感性，降低照射劑量，減少對(duì)正常細(xì)胞的損傷。
　　卵巢癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其患者死亡率居各類(lèi)婦科腫瘤的首位。卵巢癌依病期不同，可采用手術(shù)、放療、化療或以上方式綜合治療。但在放療中，由于各類(lèi)卵巢癌細(xì)胞對(duì)射線(xiàn)的敏感性不同，且癌細(xì)胞致死所需放射量和正常組織的耐受量差異很小，故有放療效果欠佳或?qū)φ＝M織的損傷較重等弊端，因此，有必要對(duì)放射增敏劑在卵巢癌放療中應(yīng)用的可能性進(jìn)行探討。
　　本實(shí)驗(yàn)選用染料木黃酮

3、(Genistein，Gen)、槲皮素(Quercetin，Que)和白楊素(Chrysin，Chr)三種代表性的黃酮類(lèi)化合物作為增敏藥物，以對(duì)放療不敏感的人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞株SKOV3作為卵巢癌的細(xì)胞模型，采用X射線(xiàn)照射，從提高腫瘤細(xì)胞放射敏感性的方法入手，并結(jié)合黃酮類(lèi)化合物自身的藥理學(xué)特性，研究黃酮類(lèi)化合物的放射增敏作用及其機(jī)制，并探討了黃酮類(lèi)化合物作為放射增敏劑的可能性，以期為黃酮類(lèi)化合物在放射增敏方面的進(jìn)一步研究提供實(shí)

4、驗(yàn)依據(jù)。具體內(nèi)容如下:
　?。ㄒ唬S酮類(lèi)化合物對(duì)SKOV3細(xì)胞的毒性
　　采用MTT法篩選出三種黃酮類(lèi)化合物對(duì)SKOV3細(xì)胞的無(wú)毒濃度范圍。結(jié)果表明，超出一定濃度范圍的染料木黃酮、槲皮素和白楊素作用于SKOV3細(xì)胞24，48，72 h后，與同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)的正常對(duì)照組相比，SKOV3細(xì)胞存活率均顯著性下降(P＜0.05)，且呈現(xiàn)一定的濃度和時(shí)間依賴(lài)性(P＜0.05)。染料木黃酮、槲皮素和白楊素作用于SKOV3細(xì)胞72 h的無(wú)毒濃度

5、應(yīng)分別小于31.12，15.30，20.77μ mol·L-1，說(shuō)明染料木黃酮的細(xì)胞毒性相對(duì)較低。
　　（二）黃酮類(lèi)化合物對(duì)SKOV3細(xì)胞的放射增敏作用
　　無(wú)毒濃度范圍內(nèi)的黃酮類(lèi)化合物，即2.5～30μ mol·L-1Gen、1.25～15μ mol·L-1Que和1.25～20μ mol·L-1Chr，分別于照射前2h預(yù)作用于SKOV3細(xì)胞，X射線(xiàn)(2，4，6，8，10 Gy)單次照射后72 h，采用MTT法檢測(cè)放射增敏

6、作用。三種黃酮類(lèi)化合物對(duì)SKOV3細(xì)胞的放射增敏比(SER)分別為1.37～2.06，1.20～1.80和1.23～1.83，三種黃酮類(lèi)化合物的各藥物濃度組的SER值均有顯著性差異(P＜0.01)，放射生物學(xué)參數(shù)D0、Dq和N值均較單純放射組顯著性減小(P＜0.05)，且隨藥物濃度的增大，SER值增大(P＜0.01)，D0、Dq和N值減小(P＜0.05)。結(jié)果表明，一定濃度范圍內(nèi)的染料木黃酮、槲皮素和白楊素均對(duì)SKOV3細(xì)胞有放射增敏作

7、用，使SKOV3細(xì)胞的放射損傷修復(fù)能力降低，放射敏感性增強(qiáng)，且染料木黃酮的放射增敏作用相對(duì)較強(qiáng)。
　?。ㄈ┤玖夏军S酮對(duì)SKOV3細(xì)胞放射增敏機(jī)制的研究
　　5，10，20μmol·L-1Gen分別于照射前2h預(yù)作用于SKOV3細(xì)胞，X射線(xiàn)(2，4，6 Gy)單次照射后24，48 h，采用試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量及T-AOC水平，采用PI單染法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布，采用Hoechst33342單染法結(jié)合熒

8、光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡，采用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)Bcl-2、Bax、Survivin、NF-κB mRNA及蛋白表達(dá)。
　　照射后24，48 h，單純加藥組、單純放射組以及加藥聯(lián)合放射組的SKOV3細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量及細(xì)胞凋亡率均顯著性高于同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)的正常對(duì)照組(P＜0.05)，加藥聯(lián)合放射組的ROS、MDA含量及細(xì)胞凋亡率比相同濃度單純加藥組或相同劑量單純放射組的顯著增加(P＜0.05)，且隨藥物濃度和

9、放射劑量的增大，ROS、MDA含量及細(xì)胞凋亡率相應(yīng)增加(P＜0.05);與同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)的正常對(duì)照組相比，單純放射組和加藥聯(lián)合放射組的T-AOC水平、G1期細(xì)胞比例顯著性降低(P＜0.05)，G2/M期細(xì)胞比例上升(P＜0.05)，且與放射劑量存在一定的相關(guān)性(P＜0.05)，但無(wú)藥物濃度依賴(lài)性(P＞0.05)。
　　照射后48 h，與正常對(duì)照組相比，6 Gy單純放射和20μ mol·L-1Gen+6Gy聯(lián)合作用均使SKOV3細(xì)胞的B

10、cl-2、Bax mRNA和NF-κB mRNA及蛋白表達(dá)顯著性上調(diào)，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著性下調(diào)(P＜0.01)，且聯(lián)合作用組的Bax mRNA、NF-κB mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著性高于單純放射組(P＜0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著性低于單純放射組(P＜0.01);20μ mol·L-1Gen和20μ mol·L-1Gen+6 Gy聯(lián)合作用均使Bax蛋白表達(dá)高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，且聯(lián)合作用組的Bax蛋白表達(dá)水平顯

11、著性高于20μ mol·L-1Gen組和單純放射組(P＜0.01);將各組之間的Bcl-2/Bax mRNA及蛋白表達(dá)比值進(jìn)行比較，20μmol·L-1Gen、6 Gy單純放射和20μ mol·L-1Gen+6 Gy組的Bcl-2/Bax比值均較正常對(duì)照組減小(P＜0.05)，且聯(lián)合作用組顯著性小于20μ mol·L-1Gen組以及6 Gy單純放射組(P＜0.01);20μ mol·L-1Gen和6 Gy單純放射均使Survivin蛋白