組織破碎提取法機理的粉末顯微特征與有效成分含量雙指標評價研究.pdf

1、　　目的：
　　西洋參為名貴中藥,西洋參中主要的藥理活性成分是人參皂苷、西洋參多糖等,而對此類化學成分的提取多是回流提取法和超聲提取法等,本文將組織破碎提取技術首次應用于西洋參中人參皂苷的提取研究,確立西洋參的最佳提取工藝,組織破碎提取具有快速、安全、節(jié)能、高效、環(huán)保及熱敏性成分不受破壞的特點,從而為西洋參的研究提供極大的便利。組織破碎提取法經(jīng)過十多年的發(fā)展,對其高效、快速的事實已基本得到學術界的認可,但對其在非加熱的情況下能夠

2、在數(shù)秒之內(nèi)快速實現(xiàn)提取過程的機理還不十分清楚。因此,本文以西洋參為例,對其組織破碎提取過程中藥材微觀狀態(tài)(顯微特征)的變化進行探討,并通過以 HPLC方法測定提取工藝中西洋參皂苷類成分評價其提取效率,根據(jù)該雙指標對組織破碎提取法(STE)高效、快速的提取機理進行客觀評價,從而對組織破碎提取技術在中藥領域的推廣和發(fā)展做出重要推動。由于國產(chǎn)西洋參與進口西洋參的質(zhì)量存在一定差異,因此本文在組織破碎提取工藝的基礎上,建立了西洋參(國產(chǎn)、進口)中

3、人參皂苷的 HPLC現(xiàn)代分析方法,對其不同提取工藝進行對比研究,從而對國產(chǎn)和進口西洋參的質(zhì)量進行評價。
　　方法：
　　1、將組織破碎提取新技術應用于西洋參中人參皂苷的提取研究,以固液比例、提取時間和提取次數(shù)為因素,每個因素選取三個水平,按照 L9(34)正交表安排正交試驗,以西洋參中人參總皂苷為指標,運用紫外分光光度計測定西洋參提取物中人參總皂苷的含量。
　　2、將中藥顯微鑒別實驗用于西洋參經(jīng)組織破碎提取前后藥

4、材顯微特征的變化研究,同時以超聲提取法和回流提取法為參照,對比三種方法提取前后的粉末特征和顯微特征(淀粉粒、樹脂道、木栓細胞、導管、草酸鈣簇晶及視野內(nèi)的整體特征等),分別加以觀察、拍照、記錄和總結(jié)。對西洋參選用 70%丙酮、水和丙酮三種溶劑,分別進行組織破碎提取,對比各提取溶劑提取前后及不同溶劑間的粉末特征和顯微特征,分別加以觀察、拍照、記錄和總結(jié)。
　　3、首次以組織破碎提取法用于西洋參的提取,運用高效液相色譜儀,對進口西洋參

5、中5種人參皂苷含量進行同步測定和進口西洋參中 3種人參皂苷進行定性分析；對國產(chǎn)西洋參中人參皂苷Rg1含量進行測定并進行相關方法學考察。
　　結(jié)果：
　　通過極差分析得到提取次數(shù)為主要影響因素,通過方差分析得到西洋參組織破碎提取最佳工藝為：以 70%丙酮為溶劑,提取固液比為：1：40、提取時間為：3min、提取次數(shù)為：3 次,同時,將此最佳工藝分別與回流提取法、超聲提取法進行對比研究,實驗結(jié)果表明：組織破碎提取法的時間短、

6、效率高,大大節(jié)省了時間和能源。
　　通過對比提取前后藥材顯微特征發(fā)現(xiàn)：西洋參提取前后的顯微特征均發(fā)生不同程度的變化,從而從微觀角度佐證了組織破碎提取技術對中藥西洋參提取時的工作機理。選用水和丙酮為提取溶劑時,提取前后西洋參粉末的特征變化不同于70%丙酮。
　　試驗確定的 HPLC 條件為：采用梯度洗脫,使用 InertexC18色譜柱,乙腈-水為流動相,流速為 1mL.min-1,柱溫為室溫,紫外檢測器,在 203nm

7、處測定西洋參供試品。在選定的色譜條件下每種成分在各自的濃度范圍內(nèi)均具有較好的線性相關性,國產(chǎn)西洋參中人參皂苷Rg1和進口西洋參中5種人參皂苷均取得了較好的加樣回收率,同時,與超聲提取法進行比較研究,超聲提取法在提取效率和人參皂苷提取收率上均不及組織破碎提取法,從而為西洋參的提取工藝研究開辟了新的途徑。
　　結(jié)論：
　　1、通過本文的研究,首次確立了西洋參組織破碎提取的最佳工藝：即 70%丙酮為溶劑,提取固液比為1：40,

8、提取時間3min,提取次數(shù)3次。此工藝條件下,西洋參總皂苷成分的含量最高,且該提取工藝與其它工藝相比時間短、效率高、節(jié)省溶劑和能源,為西洋參的后續(xù)相關研究提供一種簡便的提取工藝。
　　2、以西洋參為例,首次闡明了組織破碎提取法高效快速的提取機理,在閃式提取器快速攪拌、超強振動、超動分子滲濾技術作用下,西洋參在短時間內(nèi)由藥材飲片變?yōu)榧毞?藥材的木栓細胞、導管及草酸鈣簇晶等顯微特征發(fā)生不同程度的變化,且不同的提取溶劑作用下,顯微特征