中國(guó)東北狍的分子遺傳多樣性研究.pdf

1、狍是我國(guó)的重要經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，在東北地區(qū)廣泛分布。近些年，由于過(guò)量狩獵，其野生種群數(shù)量急劇減少。因此，對(duì)狍的遺傳多樣性以及種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，保護(hù)好有限的野生狍資源是一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。 隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，應(yīng)用分子遺傳標(biāo)記對(duì)野生動(dòng)物的遺傳變異進(jìn)行研究較為準(zhǔn)確。有關(guān)野生狍遺傳標(biāo)記研究的報(bào)道較為少見，從分子水平上對(duì)中國(guó)東北狍遺傳變異的研究尚未見報(bào)道。為了初步了解中國(guó)東北區(qū)狍遺傳資源的遺傳結(jié)構(gòu)，本研究采集了中國(guó)東北地區(qū)3個(gè)區(qū)系的9

2、個(gè)狍群體，通過(guò)線粒體DNA(mtDNA)控制區(qū)的部分序列變異、隨機(jī)擴(kuò)增微衛(wèi)星多態(tài)性(RAMP)標(biāo)記以及微衛(wèi)星(MS或SSR)標(biāo)記，對(duì)中國(guó)東北區(qū)狍的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳聯(lián)系進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下： 1.本研究對(duì)12個(gè)狍樣本mtDNAD-loop區(qū)部分序列進(jìn)行測(cè)定，獲得了614bp的序列片斷，在可比較的562bp序列中，存在40個(gè)變異位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)的比例為7.12％，其中，20個(gè)是單一多態(tài)位點(diǎn)，20個(gè)是簡(jiǎn)約化信息位點(diǎn)，轉(zhuǎn)換38個(gè)，顛

3、換2個(gè)。此外，還存在2個(gè)未測(cè)出位點(diǎn)，3個(gè)插入/缺失位點(diǎn)。共檢測(cè)到12種單倍型，單倍型間的序列差異平均為2.00％。所測(cè)定的東北狍核苷酸多樣度(π)比較低，僅有0.0204。AMOVA分析，有58.09％的變異來(lái)自種群內(nèi)，20.58％的變異來(lái)自區(qū)系間，21.33％的變異來(lái)自區(qū)系內(nèi)種群間。通過(guò)遺傳距離的計(jì)算和聚類分析結(jié)果顯示，3個(gè)區(qū)系的東北狍大致歸于各自分組。 2.在RAMP標(biāo)記分析中，從112個(gè)引物組合中篩選出16組RAMP引物用

4、于31個(gè)狍樣本分析，共檢測(cè)出87條帶，83條帶表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)百分率為95.4％。每個(gè)引物擴(kuò)增出3～9個(gè)明顯的片斷，平均5.4條擴(kuò)增帶。16組引物的擴(kuò)增條帶中有3組引物6條擴(kuò)增帶一致，不存在多態(tài)性，其余均產(chǎn)生了豐富的多態(tài)性。通過(guò)UPGMA聚類分析，得到與mtDNA控制區(qū)序列檢測(cè)相似的結(jié)果，即長(zhǎng)白山群體和大興安嶺群體均明顯地歸于各自分組，且遺傳關(guān)系較近。 3.本研究采用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)，對(duì)東北狍進(jìn)行遺傳多樣性檢測(cè)。從7個(gè)白尾鹿微衛(wèi)

5、星位點(diǎn)和13個(gè)赤鹿微衛(wèi)星位點(diǎn)中篩選得到5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，分別為：ETH3、ODOSTSH、ETH225、CSSM22和CSSM66。5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在31個(gè)狍基因組DNA中共得到18個(gè)等位基因，平均3.6個(gè)。其中ETH3位點(diǎn)最少，為2個(gè)等位基因，ETH225位點(diǎn)最多，為5個(gè)等位基因，ODOSTSH位點(diǎn)為3個(gè)等位基因，CSSM22和CSSM66均為4個(gè)等位基因。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)ETH225位點(diǎn)中的C等位基因頻率非常低，僅為0.0806。根據(jù)位點(diǎn)的等