東北區(qū)狍遺傳多樣性及性別基因鑒定研究.pdf

1、狍是一種重要的狩獵動物，在中國東北地區(qū)分布廣泛。但由于過量捕獵，野生種群數(shù)量急劇減少。所以，對狍的遺傳多樣性以及種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，保護(hù)好有限的野生狍資源是一項緊迫的任務(wù)。 分子水平的研究是目前進(jìn)行野生動物遺傳變異研究較為準(zhǔn)確的遺傳標(biāo)記。有關(guān)東北區(qū)狍遺傳標(biāo)記研究尚未見報道，直接使用DNA序列分析探索野生狍遺傳變異也僅見于國外學(xué)者對歐洲狍和西伯利亞狍的研究。本研究試圖通過RAPD標(biāo)記和線粒體DNA測序，對存在于核內(nèi)及核外的遺傳物

2、質(zhì)變異情況進(jìn)行研究，同時對鹿類動物的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行分析。通過狍Sry基因PCR擴(kuò)增和測序，對狍的性別決定機制進(jìn)行研究，進(jìn)而對野生狍自然種群的性別結(jié)構(gòu)作出評估。 在RAPD標(biāo)記分析中，從80個隨機引物中篩選20個對32個狍樣本進(jìn)行了擴(kuò)增，每個引物擴(kuò)增出2～8個明顯的片斷，共檢出123條帶，114條帶表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)百分率92.7％。多態(tài)條帶比率(PPB)、Shannon多樣指數(shù)及Nei基因多樣性指數(shù)(h)均顯示東北狍較為豐富的遺傳

3、多樣性。東北地區(qū)長白山、大興安嶺和完達(dá)山3個地理種群中，大興安嶺種群遺傳多樣性最低。UPGMA聚類分析能夠清楚區(qū)分3個地理居群的個體，多態(tài)條帶表型的主座標(biāo)分析(PCA)更直觀地展現(xiàn)了這一結(jié)果。在進(jìn)行居群遺傳分化分析時，采用Nei遺傳距離、Gst基因分化系數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)的階層分析和AMOVA遺傳變異巢式分析等多種方法，結(jié)果顯示東北狍種群分化程度不高，遺傳變異主要來自種群內(nèi)。 線粒體DNA是核外遺傳物質(zhì)，由于其分子結(jié)構(gòu)

4、簡單、進(jìn)化速率快等特點常被用來進(jìn)行遺傳多樣性分析和系統(tǒng)發(fā)育研究。本研究對16個狍樣本mtDNAD-loop區(qū)序列進(jìn)行了測定，經(jīng)鑒定舍棄其中4條序列。12個樣本獲待了614bp的序列片斷，在可比較的562bp序列中，存在40個變異位點，多態(tài)位點的比例為7.12％，其中20個是單態(tài)位點，20個是簡約化信息位點，轉(zhuǎn)換38個，顛換2個。此外還存在2個未測出位點，3個插入/缺失位點。共檢測到12種單元型，單元型間的序列差異平均為2.00％。核苷酸

5、多樣度(π)比較低，僅有0.0204。AMOVA分析，有58.09％的變異來自種群內(nèi)，結(jié)果與RAPD分析完全一致。mtDNAD-loop數(shù)據(jù)支持將東北區(qū)狍歸為Capreoluspygargus種下的一個亞種(Capreoluspygargusmantschuricus)，Capreoluspygargus與Capreoluscapreolus互為獨立種。通過構(gòu)建系統(tǒng)樹和單元型網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖確定各群體間的關(guān)系。 本研究測定了東北狍mt

6、DNACytb基因445bp序列片斷，結(jié)合GenBank相關(guān)序列資源對2科12屬18種鹿類動物的系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行了重建。最大簡約法、最大似然法和貝葉斯法3種方法構(gòu)建的基因樹的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致。結(jié)果表明，狍是美洲鹿亞科中分化較早的類群；在鹿科動物4個亞科中獐是最為原始的種類，其次是美洲鹿和麂，而鹿是進(jìn)化程度較高的類型。 用人的SRY基因篩選出的一對引物成功對狍Sry基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果顯示性別特異性。同時，本研究首次對狍S