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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]
通過融合蛋白技術(shù),將腫瘤組織高表達(dá)的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的底物序列作為融合肽段,與hTNF-α構(gòu)建成為具有靶向性的重組hTNF-α融合蛋白,并將其純化,利用生物信息學(xué)手段對(duì)其結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)做出預(yù)測(cè)和分析。
[方法]
把本課題組先前構(gòu)建的融合蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌表達(dá)菌Rosette2中,分別表達(dá)、純化出四種帶有GST標(biāo)簽的fold
2、on-MMPs-hTNF-α,經(jīng)Western Blot鑒定,再用凝血因子(Factor Xa)切除載體GST標(biāo)簽;利用非變性凝膠電泳檢測(cè)去標(biāo)簽后各蛋白在體外形成三聚體的情況;分別用基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1、MMP-8、MMP-2和MMP-9酶切相應(yīng)的融合蛋白;最后利用Chromas2、Antheprot、Cn3D等軟件,對(duì)其結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析。
[結(jié)果]
經(jīng)誘導(dǎo)得到可溶性融合蛋白,成功切除GST標(biāo)
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