輸尿管逆向注射重組腺病毒介導的BMP-7在大鼠腎間質損害的作用及三七總皂甙干預實驗.pdf

1、目的：構建出具有轉染后能表達活性的骨形態(tài)形成蛋白-7的重組腺病毒。將已構建好的重組腺病毒直接導入腎纖維化大鼠腎臟，觀察其抗腎纖維化的作用，為腺病毒介導BMP-7的進一步基因治療提供可靠的實驗基礎；同時對照研究三七總皂甙對腎間質纖維化和BMP-7的影響與機制。
　　方法：無菌級雄性SD大鼠64只隨機分為四組：（1）假手術組（S）：大鼠手術剖腹后僅游離左側輸尿管但不結扎。（2）單側輸尿管梗阻組（U）：大鼠行手術剖腹，分離并于腎盂下結扎

2、左側輸尿管。（3）BMP-7治療組（B）：大鼠行手術剖腹，自結扎處以上的輸尿管逆行注射包含無菌生理鹽水BMP-7病毒的混合液，注射后局部壓迫片刻并隨即于注射處上方結扎輸尿管，在兩處結扎之間離斷輸尿管。（4）三七總皂甙治療組（P）：大鼠行手術剖腹，分離并于腎盂下結扎左側輸尿管，術后每晚給予三七總皂甙（PNS）腹腔注射1次,每只大鼠每次注射100mg/kg。S組、B組和U組同時給予同樣劑量的蒸餾水，腹腔注射。造模后第7、14、21、28d每

3、組處死四只大鼠，取左側腎臟進行病理切片觀察，并作指標檢測。以免疫組織化學方法檢測腎組織中α-SMA蛋白的表達水平，以逆轉錄-多聚酶鏈反應技術檢測TGF-β1的表達水平。
　　結果：光鏡下觀察，HE及Masson染色S組未見異常。HE染色可見U組、B組及P組各時相點大鼠腎臟腎小球均無明顯變化。U組術后第7天腎小管擴張明顯，上皮細胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質大量炎癥細胞浸潤，間質寬度明顯增加，偶見萎縮腎小管；第14天上述病變加重，可

4、見彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質及外髓萎縮的腎小管較多，間質中大量淋巴單核細胞浸潤，纖維化較明顯。Masson染色可見U組術后7天腎小管擴張，腎間質寬度增加，膠原纖維增加，染色加深此后，病變逐漸加重。P組與B組平行相比腎小管間質病變程度明顯減輕，腎間質相對面積明顯減少(P<0.01)。三組間比較均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。免疫組織化學結果顯示：與S組相比，U組腎小管間質α-SMA表達及腎小管間質損傷指數(shù)明顯

5、增高（P<0.05）。UUO術后7天和14天，可見α-SMA陽性的轉化分化小管上皮細胞；術后21天，轉分化的小管上皮細胞明顯減少。與U組相比，B組、P組治療后腎小管間質α-SMA表達顯著減少（P<0.05），并且B組低于P組，（P<0.05）。RT-PCR結果顯示：TGF-β1隨梗阻時間延長而逐漸增多，第28天，有所下降，但沒有統(tǒng)計學意義。在治療組，B組和P組均比同一識相點U組減少，（P<0.05）.
　　結論：
　?。?）

6、單側輸尿管結扎可以快速建立腎臟細胞轉分化和間質纖維化動物模型。
　?。?）在本課題研究中，將治療基因BMP-7成功、高效地轉移到腎臟的病灶部位，能夠明顯減輕腎間質纖維化，下調TGF-β1的表達，從而發(fā)揮其在單側輸尿管結扎模型中對腎臟的保護作用，延緩和抑制了腎間質纖維化的發(fā)展。BMP-7并能有效抑制腎小管間質炎性細胞計數(shù)和小管間質損傷。
　?。?）PNS能有效減輕UUO大鼠腎小管間質的損傷，抑制α-SMA和TGF-β1的表達。