載脂蛋白AI模擬肽D4F對小鼠肝臟脂肪樣變和炎性的抑制作用.pdf

1、目的
　　本實驗通過高脂飼料喂養(yǎng)建立與人類非酒精性脂肪性肝病(NALFD)發(fā)病過程相似的載脂蛋白E基因敲除（Apo E-/-）小鼠模型，觀察載脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)模擬肽D4F對小鼠肝臟脂質代謝的影響，探討Apo AⅠ模擬肽D4F對小鼠肝臟脂肪樣變及炎性的干預作用并進一步探討其可能的作用機制，為臨床上對NALFD的藥物治療提供依據。
　　方法
　　24只8周齡雄性Apo E-/-小鼠，經過兩周高脂(15.8％)與高

2、膽固醇(1.25％)喂食后隨機分為3組(n=8)，分別腹腔注射生理鹽水（模型組）、紊亂模擬肽sD4F(1mg/kg·d，sD4F組)和ApoAⅠ模擬肽D4F（1 mg/kg·d，D4F組）。同周齡雄性C57BL/6J小鼠喂食普通飲食并給予腹腔注射生理鹽水作為正常對照組。6周后處死，ELISA法檢測Apo E-/-及普通小鼠血漿中炎癥因子TNF-α、IL-6的含量，并取小鼠肝臟組織，采用HE染色觀察其病理形態(tài)的改變，同樣采用油紅O染色方法

3、評估肝組織脂肪變性程度，免疫組織化學方法檢測Apo E-/-及普通小鼠肝組織核因子-κB、TNF-α在肝臟中的表達與分布，同時采用Western Blotting方法檢測肝組織中NF-κB、TNF-α的含量。實驗數據采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計，兩組間比較采用單因素方差檢驗，實驗數據以均數±標準差表示，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學差異。
　　結果
　　1.小鼠肝臟組織病理切片結果顯示:光學顯微鏡下可見模型組及sD4

4、F組小鼠的肝臟細胞中出現大量的脂質滴的累積，并伴有不同程度脂肪變性及小葉間炎性細胞的浸潤;D4F組小鼠的肝臟細胞脂肪變性程度顯著減輕，小葉間炎性細胞浸潤明顯減少，與對照組小鼠相比無明顯差別。
　　2.對各組小鼠的血清細胞因子的檢測結果顯示:與對照組小鼠比較，模型組ApoE-/-小鼠血清TNF-α、IL-6的水平增高顯著，并有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與模型組小鼠相比，D4F組血清TNF-α、IL-6的含量明顯下降，分別為模型組的

5、48.6％和63.4％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); sD4F組與模型組比較各項指標無統(tǒng)計學差異。
　　3.免疫組化結果顯示:TNF-α在正常組小鼠肝細胞胞漿內幾乎無表達，而在模型組小鼠肝細胞胞漿內有顯著表達(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝細胞胞漿內TNF-α表達明顯減少(P＜0.05)，較模型組減少42.4％; NF-κB在正常組小鼠肝細胞胞漿內有表達，在細胞核內幾乎無表達，而在模型組小鼠肝細胞胞漿及胞核內均顯著

6、表達(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝細胞胞核內NF-κB表達明顯減少(P＜0.05)，為模型組的45.5％; sD4F組與模型組比較各項指標無統(tǒng)計學差異。
　　4.蛋白印跡結果顯示:TNF-α在正常組小鼠肝組織內幾乎無表達，而在模型組小鼠肝組織內有顯著表達（P＜0.05），與模型組相比，D4F組肝組織內TNF-α表達明顯減少(P＜0.05); NF-κB在正常組小鼠肝組織內有少量表達，在細胞核內幾乎無表達，而在模型組小鼠

7、肝組織內均顯著表達(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝組織內NF-κB表達明顯減少(P＜0.05); sD4F組與模型組比較各項指標無統(tǒng)計學差異。
　　結論
　　高脂飲食引起Apo E-/-小鼠肝臟脂質沉積，并繼發(fā)肝臟炎性改變;Apo AⅠ模擬肽D4F能夠減少高脂飲食Apo E-/-小鼠肝臟脂質的沉積，同時能夠減輕肝臟組織的炎性改變，說明D4F具有預防小鼠肝臟脂肪變性及炎性的作用;Apo AⅠ模擬肽D4F對小鼠肝臟脂肪