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1、南華大學(xué)博士學(xué)位論文ARL1在直腸癌細胞對醛類化合物解毒中的作用研究姓名:祖旭宇申請學(xué)位級別:博士專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師:廖端芳曹德良200705014ARL1在直腸癌細胞對醛類化合物解毒中的作用研究摘要摘要由機體正常生理條件下,或病理條件下所產(chǎn)生的醛酮類化合物如丙稀醛(acrolein)巴豆醛(crotonaldehyde)4羥基壬烯醛(4HNE)和丙二醛(malondiadehyde)等,如果在體內(nèi)積淀過多將對細胞內(nèi)許多組
2、分包括蛋白和核酸造成損害。這種損害將導(dǎo)致基因突變,染色體斷裂,細胞信號通路異常,嚴重的損害將導(dǎo)致細胞凋亡或壞死。而細胞內(nèi)相應(yīng)的防衛(wèi)系統(tǒng)可將該類有毒代謝產(chǎn)物氧化或還原。人類醛糖還原酶類似蛋白質(zhì)1(ARL1)是屬于醛酮還原酶超家族的一個新成員,它在正常消化道中有較高表達,但對它的生物學(xué)功能還了解不多。該蛋白在原發(fā)性肝癌和肺癌中有極高表達,這說明ARL1可能參與腫瘤的發(fā)生,發(fā)展或影響腫瘤細胞的藥物敏感性。本研究探討了ARL1在直腸癌細胞對醛類
3、化合物進行解毒中的作用。在研究中,檢測了重組ARL1對丙稀醛巴豆醛和4羥基壬烯醛的酶活性,結(jié)果表明,ARL1對丙稀醛(Km為0.1100.012mMVmax為3122.064.7nmolmgmin),巴豆醛(Km為0.0820.014mMVmax為2647.0132.2nmolmgmin)和4羥基壬烯醛(Km為0.0310.007mM,Vmax為3296245.9nmolmgmin)都有較高的酶活性。通過EGFPARL1融合蛋白在293
4、T細胞內(nèi)瞬時表達,發(fā)現(xiàn)與對照細胞比較,有EGFPARL1融合蛋白表達的細胞在平板單細胞生長能力和軟瓊脂克隆形成能力方面增加了60%(p0.05)。在5μM丙稀醛存在的情況下,有EGFPARL1融合蛋白表達的細胞在其平板中的單細胞生長能力和軟瓊脂克隆形成能力是對照細胞的3倍,并且其在軟瓊脂中所形成的克隆遠大于對照細胞。細胞毒性實驗表明,EGFPARL1融合蛋白在293T細胞內(nèi)的表達明顯減少高濃度丙稀醛(25μM及50μM)所引起的細胞死亡
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