青海藏羊片形吸蟲(chóng)生物學(xué)特性研究.pdf

1、本研究以青海藏羊體內(nèi)片形吸蟲(chóng)和片形吸蟲(chóng)中間宿主椎實(shí)螺為研究對(duì)象，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子分類學(xué)方法進(jìn)行了螺體內(nèi)蚴蟲(chóng)以及成蟲(chóng)的蟲(chóng)種分類、鑒定。采用壓片鏡檢的方法對(duì)青海省部分地區(qū)中間宿主螺、螺體內(nèi)蚴蟲(chóng)感染率進(jìn)行了調(diào)查，同時(shí)，用大蒜素和苦參堿兩種植物提取物對(duì)椎實(shí)螺進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，以在實(shí)驗(yàn)室條件下，篩選出殺死中間宿主螺的有效藥物。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在椎實(shí)螺中收集到雷蚴、尾蚴并在培養(yǎng)青海蘿卜螺的水中收集到囊蚴。經(jīng)形態(tài)學(xué)初步鑒定三種蚴蟲(chóng)

2、均為肝片吸蟲(chóng)蚴蟲(chóng)，進(jìn)一步提取寄生于蚴蟲(chóng)基因組DNA，對(duì)18S rRNA基因片段進(jìn)行克隆與測(cè)序，對(duì)收集到的蚴蟲(chóng)進(jìn)行分子分類學(xué)鑒定，所測(cè)片段長(zhǎng)度為1805bp，用DNAMAN進(jìn)行序列比對(duì)分析，顯示與GenBank中的大片吸蟲(chóng)(Fasciola gigantica)18S rRNA基因序列相似性為92.03％，與肝片吸蟲(chóng)（Fasciola hepatica）的相似性為99.12％。綜合同源進(jìn)化樹(shù)圖譜可以進(jìn)一步確定所收集的蚴蟲(chóng)為肝片吸蟲(chóng)的蚴蟲(chóng)。

3、⑵傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定方法無(wú)法對(duì)肝片吸蟲(chóng)及大片吸蟲(chóng)的中間種類進(jìn)行分類鑒定，本試驗(yàn)對(duì)其成蟲(chóng)采用18S rRNA基因克隆及序列分析的方法，測(cè)出目的片段大小為1834bp。并將測(cè)得序列用DNAMAN軟件與GenBank中已發(fā)表的大片吸蟲(chóng)的18S rRNA基因序列比對(duì)，其相似性為92.92％，與肝片吸蟲(chóng)的18SrRNA基因序列相似性為99.78％，結(jié)合同源進(jìn)化樹(shù)圖譜可以確定所采成蟲(chóng)樣品為肝片吸蟲(chóng)。⑶試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)所調(diào)查地區(qū)的椎實(shí)螺主要有三個(gè)種，分別為青

4、海蘿卜螺（Radix cucnnorica）、橢圓蘿卜螺（Radix swinhoei）和狹蘿卜螺(Radix lagotis)。通過(guò)對(duì)螺體進(jìn)行壓片鏡檢及在實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)椎實(shí)螺，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：橢圓蘿卜螺體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)肝片吸蟲(chóng)蚴蟲(chóng)寄生，狹蘿卜螺體內(nèi)發(fā)現(xiàn)雷蚴寄生，感染率較低，10％。青海蘿卜螺體內(nèi)發(fā)現(xiàn)有雷蚴和尾蚴寄生，感染率較高，達(dá)41.33％，隨后在培養(yǎng)青海蘿卜螺的器皿中成功收集到囊蚴，而在狹蘿卜螺和橢圓螺的培養(yǎng)過(guò)程中并未收集到囊蚴。表明青海藏

5、羊肝片吸蟲(chóng)的主要中間宿主螺為青海蘿卜螺。⑷利用大蒜素和苦參堿兩種植物提取物對(duì)椎實(shí)螺在實(shí)驗(yàn)室條件下浸殺滅螺效果進(jìn)行了試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)，大蒜素經(jīng)48h，濃度為8mg/L的條件下，死亡率為70％；苦參堿經(jīng)96h，濃度為24mg/L的條件下，死亡率為100％。這兩種提取物的48h的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為6.02mg/L和45.55mg/L。表明大蒜提取物對(duì)椎實(shí)螺的滅殺效果較苦參提取物的滅殺效果好，即椎實(shí)螺對(duì)大蒜提取物的抵抗能力比對(duì)苦參提取