溫度和鹽度對菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)熱休克蛋白家族基因表達的影響.pdf

1、本實驗利用RACE-PCR技術(shù)克隆了蛤仔HSP60基因全長，結(jié)果表明，蛤仔 HSP60 cDNA全長1777bp(含ploy A序列)，GenBank登錄號：KT987978，包括1728bp的開放閱讀框(ORF)，21bp的5’端非編碼區(qū)(5’-UTR)和49bp的3’端非編碼區(qū)(3’-UTR)，編碼575個氨基酸，推導(dǎo)蛋白分子量(Mw)為61.25 kDa，等電點(pI)為5.04，N末端無信號肽結(jié)構(gòu)，序列同源性比對發(fā)現(xiàn)該基因與已知

2、的HSP60基因序列同源性較高(80％)。
　　本研究成功克隆了菲律賓蛤仔的HSP60基因全長，為進一步深入研究蛤仔的抗逆機理及其遺傳改良奠定了基礎(chǔ)。采用實時熒光定量 PCR技術(shù)，對HSP40、60、90基因在野生及3種殼色品系（海洋橙、斑馬、白蛤）蛤仔的血細胞、閉殼肌、外套膜、足、鰓和消化腺中的表達情況進行了研究。結(jié)果顯示： HSP40、60、90在野生和3種殼色蛤仔不同組織均有表達。以外套膜中的表達量為對照組，其中，HSP40

3、基因在野生和3種殼色鰓組織中表達水平最高（p<0.01），而在閉殼肌中的表達水平最低；HSP60基因在野生、海洋橙和斑馬蛤血細胞中表達量水平最高(p<0.01)，在白蛤鰓組織中表達水平最高(p<0.01)，在野生和3種殼色蛤仔閉殼肌中的表達水平最低；HSP90基因在野生和斑馬蛤血細胞中的表達量水平最高(p<0.01)，在海洋橙和白蛤鰓組織中的表達量最高(p<0.01)，在野生和3種殼色閉殼肌中的表達水平最低。表明蛤仔HSPs基因家族具有

4、組織特異性的表達模式。研究低鹽（15）環(huán)境下HSP40、60、90在不同殼色品系蛤仔鰓組織中的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HSP40基因在野生、斑馬蛤和海洋橙殼色個體鰓組織中表達量變化表現(xiàn)出相同的規(guī)律，均為先升高后下降，又升高達到最高表達量的過程；在白蛤個體的表達量則為先下降后升高的過程。并且，在各個時間點，海洋橙鰓組織中的相對表達量都高于其它三種殼色；HSP60基因在野生蛤仔鰓組織中表達量變化為先上升后下降后又上升的過程，在海洋橙蛤鰓組織中表

5、達量則表現(xiàn)為逐漸上升并在96h時達到最高值（p<0.01），在斑馬和白蛤鰓組織表達量變化為逐漸升高分別在24h，72h達到最高而后逐步恢復(fù)的過程；HSP90基因在野生、斑馬、白蛤鰓組織表達量變化為先上升后分別在72h，12h，72h到達較高值而后逐漸恢復(fù)，在海洋橙體內(nèi)其表達量變化未顯示出規(guī)律性,說明低鹽可以誘導(dǎo)HSP40、60、90基因的高表達。研究了高溫和低溫（30℃、-1℃）脅迫對不同品系蛤仔HSP40、60、90表達的影響。結(jié)果表

6、明：在受到高溫脅迫后，HSP40表達量在不同殼色蛤仔鰓組織中表現(xiàn)出相同的變化過程，即為先逐步升高而后逐漸恢復(fù)，且在各個時間點，海洋橙的表達程度均高于其它三種殼色；HSP60表達量在野生、海洋橙和白蛤的鰓組織中均表現(xiàn)為逐步升高而后逐漸恢復(fù)到正常水平，其中在野生蛤仔內(nèi)6h達到最高值（p<0.05），而在海洋橙和白蛤96h達到最高表達量（海洋橙p<0.05，白蛤p<0.01）。斑馬蛤0-24h維持在較低水平，在48h出現(xiàn)一次高表達量，96h達

7、到最高表達量（p>0.05）；HSP90在4種殼色蛤仔鰓組織中表達量變化表現(xiàn)出相同趨勢，0-6h持續(xù)升高到最高表達量后下降至正常水平。受到低溫脅迫后，HSP40表達量在野生群體鰓組織中呈先上升后下降的趨勢，在6h達到最高表達量（p<0.05）；海洋橙和斑馬蛤鰓組織中呈先下降后上升趨勢，在24h時達到最高表達量（p<0.05）；白蛤鰓組織中0-24h表達量基本保持不變，在48h時達到最高表達量（p<0.05）。HSP60表達量在野生群體鰓

8、組織中表達量基本不變，與空白組持平；海洋橙鰓組織0-24h表達量不變，48h出現(xiàn)高表達量（p<0.01）；斑馬蛤鰓組織表達量持續(xù)下降，72h恢復(fù)正常水平；白蛤鰓組織表達量呈下降趨勢，48h達到最高表達量（p<0.05）。HSP90表達量在野生群體鰓組織中持續(xù)下降，96h恢復(fù)正常水平,6h、12h顯著低于空白組(p<0.05)；海洋橙鰓組織中持續(xù)上升，在48h時達到最高表達量(p<0.05)，72-96h表達量緩慢下降。斑馬蛤鰓組織0-4