pH及糖基化處理對菲律賓蛤仔原肌球蛋白性質(zhì)的影響.pdf

1、菲律賓蛤仔屬于我國四大養(yǎng)殖貝類之一，不僅味道鮮美、營養(yǎng)豐富，還具有很高的經(jīng)濟價值?！俺愿蝌?，喝啤酒”也是青島帶給世界各地游客的獨有體驗。作為人類常見的食物過敏原之一，由菲律賓蛤仔引發(fā)的過敏性疾病發(fā)病率也日益增高。本論文以菲律賓蛤仔主要過敏原——原肌球蛋白為研究對象，系統(tǒng)分析了其理化性質(zhì)，探究了pH變化及糖基化對原肌球蛋白過敏原性的影響，并采用生物信息學軟件對其抗原表位進行初步分析，為認識菲律賓蛤仔過敏及消減其過敏原性提供基礎數(shù)據(jù)。主要研

2、究結(jié)果包括:
　　1、分離并純化了菲律賓蛤仔的主要過敏原——原肌球蛋白，并利用免疫學技術進行了鑒定。進一步對其理化性質(zhì)進行表征發(fā)現(xiàn)，菲律賓蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 kDa左右，等電點為5.1;糖含量為6.34％;對熱比較穩(wěn)定，經(jīng)過沸水煮15 min，其IgG結(jié)合能力沒有明顯的變化。此外，采用RACE技術對表達原肌球蛋白的基因序列進行表征，發(fā)現(xiàn)其全長為855 bp，編碼284個氨基酸。
　　2、不同pH處理能夠部分改變菲律

3、賓蛤仔原肌球蛋白的過敏原性。在不同的pH環(huán)境條件下，采用間接酶聯(lián)免疫吸附實驗、點印記、蛋白酶酶解實驗、圓二色譜、表面疏水性及紫外光譜等系統(tǒng)解析了原肌球蛋白分子結(jié)構(gòu)與過敏原性的變化。結(jié)果表明，pH從7.0下降至1.0，原肌球蛋白的結(jié)構(gòu)趨于松散，表面疏水性降低了97.7％，免疫活性降低;在pH＞9.0的堿性條件下，原肌球蛋白的過敏性有所增高。這說明采用低pH處理能夠部分降低菲律賓蛤仔的過敏原性。
　　3、核糖引發(fā)的美拉德反應能夠有效降

4、低菲律賓蛤仔原肌球蛋白的過敏原性。在核糖的作用下，原肌球蛋白發(fā)生美拉德反應，采用酶聯(lián)免疫、點印記、圓二色譜、賴氨酸含量等對核糖與原肌球蛋白的美拉德反應產(chǎn)物進行解析，結(jié)果表明，在核糖作用12h后，原肌球蛋白的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生的明顯的變化，α-螺旋含量下降了71.7％，蛋白表面疏水性增加了192％，有效賴氨酸含量降低了45.5％，過敏原性變化分析顯示，美拉德反應產(chǎn)物的IgE結(jié)合能力下降76.2％，IgG結(jié)合能力下降86.8％。由此表明，核糖能夠

5、有效降低菲律賓蛤仔原肌球蛋白的過敏原性。
　　4、利用生物信息軟件對菲律賓蛤仔原肌球蛋白的抗原表位進行預測分析。結(jié)果表明，原肌球蛋白的氨基酸序列較為保守，不同種類軟體動物的序列之間同源性達到75％以上，有的可以達到90％以上。采用DNAstar、AntheProt生物信息學軟件并結(jié)合2個在線網(wǎng)站對原肌球蛋白的線性表位區(qū)域進行預測，得到10個抗原表位。這些表位在整個序列中的分布較為平均，有7個肽段的位置與已經(jīng)報道的表位區(qū)域存在部分重

6、合的現(xiàn)象，再根據(jù)之前的實驗結(jié)果篩選可能性最高的四個表位進行Fmoc固相合成，采用競爭點印記方法，利用兔抗蛤蜊血清和過敏患者血清對其活性進行初步驗證。4個多肽均為主要過敏原表位。
　　綜上所述，本研究對菲律賓蛤仔主要過敏原——原肌球蛋白的理化性質(zhì)進行解析，闡明了pH處理及糖基化處理對原肌球蛋白過敏原性的影響，并進一步利用生物信息學技術分析了原肌球蛋白的抗原表位。該研究結(jié)果對于認清菲律賓蛤仔過敏原的基本性質(zhì)，開發(fā)低過敏性或無過敏性貝類