多花黑麥草斑駁病毒外被蛋白基因在大腸桿菌中的表達.pdf

1、多花黑麥草(LoliummultiflorumLam)又名意大利黑麥草，為一年生或二年生草本植物。多花黑麥草營養(yǎng)物質(zhì)豐富，品質(zhì)優(yōu)良適口性好，各種家畜均喜采食。該草種生長快，分蘗力強，再生性好，產(chǎn)量高，是一種優(yōu)良的飼料用草。除了應用于畜牧業(yè)，多花黑麥草還是城市綠化的常用草種。 多花黑麥草斑駁病毒(Ryegrassmottlevirus，RGMoV)是多花黑麥草的重要病原，能引起多花黑麥草的斑駁和花葉，嚴重影響牧草的產(chǎn)量和品質(zhì)。該病

2、毒在我國至今還未見報道，為了防止該病毒通過引種傳入我國，開發(fā)出準確有效的檢測該病毒的方法是很有必要的。由于血清學方法具有靈敏、快速、適合大量樣品檢測等特點，因此在植物病毒檢測中被廣泛應用。由于很多植物病毒較難提純，于是人們嘗試利用基因工程的方法獲得病毒的外被蛋白，然后利用重組外被蛋白制備抗血清，并將所得的抗血清用于病毒的檢測。 根據(jù)已報道的多花黑麥草斑駁病毒(RGMoV)外被蛋白(CP)基因的核苷酸序列合成引物，以病毒基因組為模

3、板，用RT-PCR的方法獲得病毒的外被蛋白基因，然后將其克隆至表達載體pGEX-4T-1中，在大腸桿菌中誘導表達。SDS-PAGE電泳顯示：經(jīng)IPTG誘導，宿主大腸桿菌BL21(DE3)plys表達出了預期分子量大小(52kD)的目的蛋白。蛋白質(zhì)印跡實驗進一步證實：目的蛋白得到了正確表達，并且表達產(chǎn)物以不溶性包涵體的形式存在。用包涵體洗滌緩沖液(含2％的DOC)洗滌初提純的包涵體，去除黏附在包涵體的可溶性蛋白。用6M的鹽酸胍溶解洗滌后的