豬圓環(huán)病毒Ⅱ型ORF2基因在大腸桿菌中的克隆與表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是引發(fā)豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合征的主要病原.PCV-2 ORF2編碼的結(jié)構(gòu)蛋白具有型特異性抗原決定簇,因此它是區(qū)分PCV-1和PCV-2的重要抗原.根據(jù)已發(fā)表的PCV-2 ORF2基因序列,設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物,經(jīng)PCR方法擴(kuò)增出了702bp的基因片段.將該基因片段插入到pGEM-T-Easy載體中,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,證明成功克隆了PCV-2ORF2基因.利用分子

2、生物學(xué)軟件對(duì)PCV-2 ORF2基因進(jìn)行分析后,用PCR方法擴(kuò)增了10個(gè)ORF2基因片段并插入原核表達(dá)載體pGEX-4T-1中,經(jīng)酶切和PCR鑒定,證明成功構(gòu)建了10個(gè)pGEX-PCV2ORF2基因片段的重組表達(dá)質(zhì)粒.分別將各個(gè)重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli ER2566感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)終濃度為1mmol/L的IPTG誘導(dǎo),PCV-2ORF2編碼的蛋白片段在大腸桿菌E.coliER2566中以包涵體的形式得到大量表達(dá).Western-blo

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