留蘭香油對(duì)脂多糖或豬胰彈性蛋白酶引起的肺氣腫樣改變及MMP-9的影響.pdf

1、目的:觀察留蘭香油對(duì)脂多糖引起的大鼠肺氣腫樣改變及豬胰彈性蛋白酶引起的C57小鼠肺氣腫樣改變及對(duì)MMP-9的影響。
　　 方法:
　　 (1)SD大鼠隨機(jī)分為6組:①空白對(duì)照組;②模型組;③留蘭香油10 mg·kg-1組;④留蘭香油30 mg·kg-1組;⑤留蘭香油100 mg·kg-1組;⑥地塞米松0.3 mg·kg-1組。反復(fù)氣道內(nèi)滴入脂多糖200μg(溶于200μL生理鹽水)8周建立大鼠肺氣腫樣改變模型,留蘭香油及

2、地塞米松灌胃治療4周。測(cè)定大鼠肺功能氣道阻力(RL)及肺順應(yīng)性(Cdyn);計(jì)數(shù)大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞總數(shù)及其分類(lèi);肺組織病理切片行HE、AB-PAS染色,觀察肺泡結(jié)構(gòu)、氣道炎癥及杯狀細(xì)胞化生,并對(duì)病理圖像進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)量分析;ELISA檢測(cè)肺組織、TNF-α、IL-1β和TIMP-1的含量及MMP-9的表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。(2)C57小鼠隨機(jī)分為6組:①空白對(duì)照組;②模型組;③留蘭香

3、油14 mg·kg-1組;④留蘭香油42 mg·kg-1組;⑤留蘭香油141 mg·kg-1組;⑥地塞米松0.42 mg·kg-1組。每只C57小鼠氣管內(nèi)一次性滴入4.5 U(溶于50μL生理鹽水)豬胰彈性蛋白酶,空白對(duì)照組氣管內(nèi)滴入等量生理鹽水。第4周開(kāi)始給藥,給藥3周后放血處死。肺組織病理切片行HE染色,觀察肺泡結(jié)構(gòu)、氣道炎癥,并對(duì)病理圖像進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)量分析;用半定量RT-PCR方法檢測(cè)C57小鼠肺組織中MMP-9、TIMP-1、I

4、L-8及TNF-α mRNA的表達(dá)量。所有數(shù)據(jù)使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 (1)模型組大鼠的基礎(chǔ)RL值較對(duì)照組增加了107.6％,并且基礎(chǔ)Cdyn值下降了17.9％;留蘭香油10、30、100 mg·kg-1組的大鼠RL值分別較模型組下降41.6％、11.7％、19.0％,其中留蘭香油10mg·kg-1組的RL值較模型組有顯著改善(P＜0.05);留蘭香油10、30、100 mg·kg-1

5、組的大鼠Cdyn值較模型組增加了3.1％、16.9％、5.9％。(2)模型組大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)、分類(lèi)中中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P＜0.001),留蘭香油100mg·kg-1組及地塞米松治療組與模型組比較均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。
　　 (3)模型組大鼠肺泡大小不等,結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡管、肺泡囊和肺泡明顯擴(kuò)張,肺泡壁變薄,并有不同程度的撕裂,融合成肺大泡,與對(duì)照組比較

6、,肺平均內(nèi)襯間隔(Lm)明顯增大(P＜0.001),單位面積內(nèi)平均肺泡數(shù)(MAN)明顯減少(P＜0.001);留蘭香油組及地塞米松組與模型組比較均能使LM明顯減小,MAN顯著增多(P＜0.01,P＜0.001),肺泡破壞減少。
　　 (4)模型組大鼠可見(jiàn)不同程度的細(xì)支氣管炎及肺間質(zhì)炎,炎癥細(xì)胞明顯浸潤(rùn)。留蘭香油組及地塞米松組細(xì)支氣管炎及肺間質(zhì)炎癥較模型組有所減輕,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少,肺組織病理炎癥程度明顯減輕。
　　 (5

7、)模型組與正常組比較,支氣管、細(xì)支氣管杯狀細(xì)胞明顯化生,杯狀細(xì)胞陽(yáng)性％明顯增高(P＜0.001)。留蘭香油100 mg·kg-1組和地塞米松治療組較模型組陽(yáng)性杯狀細(xì)胞增生明顯減少,杯狀細(xì)胞陽(yáng)性％明顯降低(P＜0.05)。
　　 (6)ELISA結(jié)果顯示:模型組肺組織勻漿中的TNF-α含量高于對(duì)照組(P＜0.05),留蘭香油30 mg·kg-1組及地塞米松組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05,P＜0.001);模型組肺組織勻漿中

8、的IL-1β含量高于對(duì)照組(P＜0.001),留蘭香油100 mg·kg-1組及地塞米松組與模型組比較均有顯著差異(P＜0.05,P＜0.01);模型組肺組織勻漿中的TIMP-1與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。
　　 (7)免疫組化圖像結(jié)果表明:炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色,肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞等結(jié)構(gòu)細(xì)胞弱陽(yáng)性表達(dá)呈黃色。Image Pro-Plus6.0圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)大鼠肺組織中MMP-9表達(dá)的平均

9、光密度值(MOD),模型組肺組織MMP-9表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.001),留蘭香油組和地塞米松組與模型組比較均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。(8)C57小鼠的肺泡結(jié)構(gòu):模型組可見(jiàn)肺泡管、肺泡囊和肺泡明顯擴(kuò)張,肺泡壁變薄,并有不同程度的斷裂,融合成大泡。與模型組相比,留蘭香油組及地塞米松組小鼠肺泡壁斷裂和肺泡腔擴(kuò)張情況有所減輕。模型組與對(duì)照組比較,Lm明顯增大,MAN明顯減少;留蘭香油42 mg·kg-

10、1組及地塞米松組與模型組比較均能使Lm明顯減小,MAN顯著增多,肺泡破壞減少。
　　 (9)MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8 mRNA的表達(dá):模型組小鼠肺組織MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8與β-actin的比值較空白對(duì)照組顯著升高;留蘭香油14、42mg·kg-1及地塞米松組能顯著降低MMP-9 mRNA的表達(dá);留蘭香油14、42、141mg·kg-1及地塞米松組TIMP-1 mRNA的表達(dá)雖較模型

11、組有所下降,但均無(wú)顯著性差異;留蘭香油42、141 mg·kg-1均能降低TNF-α及IL-8 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)LPS反復(fù)氣道內(nèi)滴入能引起大鼠伴有慢性炎癥反應(yīng)的肺氣腫樣改變,表現(xiàn)為肺泡腔擴(kuò)大,肺泡壁變薄、斷裂,融合成肺大泡,肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),杯狀細(xì)胞化生,而留蘭香油對(duì)LPS引起的肺泡破壞、炎癥反應(yīng)和肺功能等均有保護(hù)作用,其機(jī)制可能是降低了肺組織TNF-α、IL-1β的含量,抑制了MMP-9的