噴霧干燥法制備噬菌體展示的1型糖尿病微球疫苗.pdf

1、疫苗對乙型肝炎、艾滋病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥及其他感染性疾病的防治和治療發(fā)揮著重要的作用，預(yù)防和治療傳染性疾病及人類非傳染性重大疾病最有效的方法是接種疫苗。疫苗包括預(yù)防性疫苗和治療性疫苗，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，未來的疫苗將以化學(xué)合成和重組DNA技術(shù)為主的肽類和蛋白質(zhì)亞單位疫苗以及核酸疫苗為主，但由于其在體內(nèi)的快速降解和消除而使它們存在的藥劑學(xué)缺陷。目前普遍采用的接種方式為注射，這種方式存在制作費用高、耐受性差和需專業(yè)技術(shù)人員操作等問題。另

2、外，由于單獨接種疫苗引起的免疫應(yīng)答微弱，為提高疫苗的免疫原性，需多次接種或應(yīng)用佐劑以誘導(dǎo)出更理想的免疫應(yīng)答?？山到獾木酆衔镂⑶蚴且环N具有佐劑效應(yīng)的疫苗控釋系統(tǒng)，它可以提供大量抗原并保護(hù)其免受生理條件下的快速降解，通過微球?qū)λ窨乖某掷m(xù)或脈沖釋放行為，有效模擬傳統(tǒng)疫苗多次免疫程序，在相當(dāng)長時間內(nèi)持續(xù)提供抗原。因而可降解的聚合物微球作為一種有效的靶向遞送系統(tǒng)，減少接種次數(shù)和免疫原的使用總量，因而可以改進(jìn)病人的適應(yīng)性、降低用藥成本。

3、 許多傳染性疾病是通過病原微生物與消化道、呼吸道和生殖道的表面黏膜接觸而引起的，口服疫苗給藥系統(tǒng)(orally administered vaccine delivery system，OAVDS)使用方便且直接刺激易感染部位(胃腸道黏膜)產(chǎn)生抗體，在抵御病原體入侵，尤其對最初在黏膜部位的病原體感染發(fā)揮重要作用，同時對兒童免疫、地區(qū)疾病的防治亦表現(xiàn)出特別的優(yōu)勢，而且OAVDS在減少接種次數(shù)、降低接種脫漏率、提高疫苗貯運管理效率及簡化接

4、種方式等方面具有重要意義。以胃腸道黏膜為輸送部位的OAVDS，是目前疫苗遞送研究的熱點之一。但由于受胃腸道因素的影響，多數(shù)蛋白類藥物易失活且吸收差，致使生物利用度低，其口服給藥系統(tǒng)研究仍面臨挑戰(zhàn)。為了解決胃腸道因素對疫苗活性影響，提高疫苗的免疫效果，增強疫苗的穩(wěn)定性、靶向性及延長疫苗作用的效期，目前新型的疫苗載體—微球載體可有效避免胃腸道環(huán)境對疫苗的降解作用，在實現(xiàn)整體式攝取后，于免疫效應(yīng)部位引發(fā)高效的應(yīng)答反應(yīng)，最終實現(xiàn)疫苗的單劑量接種

5、。目前，已有流感、乙肝和百日咳桿菌、支原體肺炎、破傷風(fēng)等多種疫苗采用微粒形式作為口服接種的載體，源于腸毒性大腸桿菌移生因子抗原的口服微球疫苗已進(jìn)入臨床前試驗。 本研究首次采用水溶性殼聚糖、海藻糖作為保護(hù)劑配方，通過噴霧干燥技術(shù)制備了噬菌體展示的1型糖尿病殼聚糖微球疫苗。掃描電鏡下觀察其形態(tài)及粒徑大小，滴度法檢測其活性及熱穩(wěn)定性。結(jié)果通過噴霧干燥法制備了粒徑大小為5—50μm左右的殼聚糖微球疫苗，收率在35％—53％左右，滴度檢測

6、顯示噴霧干燥后實驗組樣品的滴度與對照組相比均降低，并且實驗組的滴度隨著入口溫度的升高先升高而后降低，熱穩(wěn)定性分析顯示噴霧干燥樣品37℃保存一周和25℃保存6個月后，滴度下降的幅度明顯小于對照組，6個月后實驗中滴度最小降幅為21.86％、最大降幅為36.34％，而對照組下降了57.79％，與對照組相比制備的殼聚糖微球疫苗具有更好的熱穩(wěn)定性。此外，通過對結(jié)果的正交分析，我們確定了最佳的噴霧干燥工藝A4B1C3D2，即殼聚糖的濃度為1％、殼聚