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文檔簡介
1、本研究以Platinum,Sea Isle2000,Salam,Supreme4種海濱雀稗的根、莖、葉為材料,用無氮源的選擇性培養(yǎng)基、平板劃線法和顯微鏡檢測分離純化其內(nèi)生菌,結(jié)合乙炔還原法測定固氮酶活性,共分離篩選到55株具有固氮活性的內(nèi)生菌,通過SDS-PAGE及 IS-PCR將這55株內(nèi)生固氮菌進行聚類分析,并選取部分代表菌株進行16S rDNA序列測定;同時,選取固氮活性較高的菌株進行溶磷性測定和表觀形態(tài)觀測,并挑選2種代表菌株回
2、接到黑麥草、柱花草和水稻中進行促生效果驗證,得出以下結(jié)果:
?。?)55株內(nèi)生固氮菌經(jīng)特異引物PCR擴增,均得到約360 bp的nifH片段。測得固氮酶活性范圍在34.09~2948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1之間,最大為Tt22948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1,最小為Tt134.09nmol C2H2?mL-1?h-1,不同菌株的固氮酶活性差別較大。
?。?)兩種方法將55株菌株分別聚
3、為10類和11類,在SDS-PAGE中,將IS-PCR中的Group1和Group2聚為一個類群,而將Group3和Group4重新聚為兩個類群,其余均一樣,可見兩種聚類方法結(jié)果一致性較高。
?。?)選取11株代表菌株進行16S rDNA序列分析,結(jié)果表明,這些菌株分屬假單胞菌屬(Stenotrophomonas)、根瘤菌屬(Rhizobium)、埃希氏菌屬(Escherichia)、腸桿菌屬(Enterobacter)、寡養(yǎng)單
4、胞菌屬(Stenotrophomonas)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、短小桿菌屬(Curtobacterium)和勒克氏菌屬(Leclercia)8個屬,具有較大的遺傳多樣性,與全細(xì)胞蛋白電泳和指紋圖譜電泳聚類結(jié)果呈現(xiàn)的多樣性一致。
?。?)使用VM-Ethanol固體培養(yǎng)基對11株代表菌株進行外觀形態(tài)的觀察,用改良的Pikovaskaia’s固體培養(yǎng)基對17株代表菌株進行溶磷性的定量定性測定,測得16株菌株有溶磷
5、性,可溶性磷含量在9.06~29.04 ug?mL-1之間,其中Bt6溶磷量最低,為9.06 ug?mL-1,Zr2的溶磷量最高,為29.04 ug?mL-1。不同菌株的菌落形態(tài)明顯不同,革蘭氏染色多為陰性,顯微鏡觀察菌株均為桿狀形態(tài)。
?。?)選取菌株Bt10和Tr4菌株對黑麥草、柱花草和水稻進行回接,發(fā)現(xiàn)接種菌液的植株與對照相比在株高、根長、地上生物量和地下生物量方面均存在顯著差異(P<0.05)。接種菌液Tr4植株的促生效
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