禾草內(nèi)生固氮菌的分離及固氮促生效能研究.pdf

1、從禾草中分離內(nèi)生細菌，從中篩選出具有固氮酶活性、溶磷、分泌植物生長激素等多種性能的促生功能菌株。研究功能菌株在禾草內(nèi)的定殖傳導及固氮促生效能，為研制與應用多功能禾草微生物接種劑，建立禾草高效固氮體系，促進禾草生長，加強草地良性生態(tài)循環(huán)提供科學基礎(chǔ)和技術(shù)支持。 研究結(jié)果表明，高冰草，黑麥草，高羊茅和偃麥草等13個禾草品種的根、葉組織內(nèi)普遍存在著大量內(nèi)生細菌，菌群密度為8.7x104-8.06×106CFU克鮮重，根中數(shù)量最多，其次

2、為葉片。不同種，同種不同品種的禾草內(nèi)生細菌的種群密度有較大差異。采用CCM培養(yǎng)基結(jié)合無氮選擇性培養(yǎng)基，乙炔還原法測定固氮酶活篩選獲得21株內(nèi)生固氮菌菌株，其固氮酶活性在8-2865nmol/hml之間，證明從禾草中可分離到具有高固氮酶活性的菌株。測定禾草內(nèi)生固氮菌16S rDNA基因序列，分析其種群多樣性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，結(jié)果表明所分離的禾草內(nèi)生固氮菌分別屬于土壤桿菌屬(Agrobacterium)，芽孢桿菌屬(Bacillus)，根瘤菌

3、屬(Rhizobium)屬及兩個獨立的分支，其中土壤桿菌屬(Agrobacterium)為優(yōu)勢種群。Shannon多樣性指數(shù)為1.1255，Margalef豐富度指數(shù)為0.6569。 分離的禾草內(nèi)生固氮菌株中，12株具有溶磷性，溶磷強度為4.18ug/ml-54.64ug/ml；14株具有分泌植物生長素IAA的能力，IAA產(chǎn)生量為7.01μg/ml-16.55μg/ml。8株同時具有固氮、溶磷以及分泌生長素IAA的多種促生性能，

4、占內(nèi)生固氮菌菌株的38.10％。其中NB42菌株促生性能突出。 應用電鏡免疫膠體金染色技術(shù)定位人工回接內(nèi)生固氮菌ENB42在禾草體內(nèi)的定殖和傳導。表明ENB42菌株能從根部侵入宿主體內(nèi)，并通過輸導組織傳導進入葉中，但以根中定殖量較大，細胞間隙和細胞內(nèi)均有分布。15N同位素稀釋法測定ENB42在高羊茅、新麥草、紫羊茅中的生物固氮百分率為7.366-28.025％，葉片固氮量為9.834-44.686 kg/hm2間，含氮量較未接種