復(fù)方當(dāng)歸注射液對柴油機尾氣顆粒物損傷后雌鼠生殖細胞的干預(yù)研究.pdf

1、目的： 通過建立柴油機尾氣顆粒物染毒小鼠動物模型，觀察、分析柴油機尾氣顆粒物（DEP）對卵母細胞發(fā)育進程的影響，初步闡明其作用機理，評價柴油機尾氣顆粒物所致雌性生殖毒性的情況；在確定柴油機尾氣顆粒物導(dǎo)致小鼠卵母細胞損傷的基礎(chǔ)上，展開關(guān)于復(fù)方當(dāng)歸注射液對其可能的防治作用及作用機制研究，為中藥制劑在生殖功能保護方面的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，促進中醫(yī)藥的推廣應(yīng)用。 方法： 以273只21天齡健康ICR小雌鼠為研究對象。分

2、13組，除空白對照組和空白治療組外，DEP模型組（分為低、中、高劑量三個濃度）、DEP模型對照治療組（DEP中、高劑量）、中劑量模型+中藥低劑量組、中劑量模型+中藥中劑量組、中劑量模型+中藥高劑量組、高劑量模型+中藥低劑量組、高劑量模型+中藥中劑量組、高劑量模型+中藥高劑量組共11組。自21天齡至31天齡采用移液槍向小雌鼠咽后壁滴入柴油機尾氣顆粒物（俄亥俄州立大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院提供，已知主要成分和粒徑大?。覞嵋海咳煲淮?，共10天。對

3、于中藥治療組，在染毒后分別對治療組腹腔注射5g生藥/kg·d、10g生藥/kg·d和20 g生藥/kg·d復(fù)方當(dāng)歸注射液，空白治療組、DEP模型對照治療組（DEP中、高劑量）腹腔注射生理鹽水0．3ml/10g·d。觀察小鼠的一般情況、體重增長情況、卵巢濕重以及臟器系數(shù)；電鏡下觀察小鼠卵母細胞超微結(jié)構(gòu)：測定卵巢組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）含量；采用卵母細胞體內(nèi)成熟、體外受精的方法觀察DEP

4、對小鼠卵母細胞成熟的影響；應(yīng)用實時PCR技術(shù)檢測卵母細胞線粒體DNA（mtDNA）成分情況。 結(jié)果： 模型組： 1．各組間小鼠體重變化無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0．05）。卵巢濕重及卵巢臟器系數(shù)DEP的中、高劑量染毒組與對照組、DEP的低劑量組比較有顯著降低（P<0．05）； 2．電鏡下觀察可見：DEP的中、高劑量染毒組卵母細胞大部分線粒體腫脹及空泡化，而DEP的低劑量組卵母細胞結(jié)構(gòu)無改變； 3．DEP的

5、中、高劑量染毒組小鼠卵巢組織中SOD含量、GSH含量顯著降低，MDA含量顯著升高（P<0．05）； 4．各染毒組對卵母細胞生發(fā)泡破裂沒有影響，DEP的中、高劑量染毒組均可以明顯地降低小鼠體內(nèi)（0 h）卵母細胞第一極體釋放率（P<0．01）及增高卵母細胞退化率（P<0．01）。在受精24h后總體外受精率和培養(yǎng)48h后2-細胞以上胚胎卵裂率與對照組、DEP的低劑量組相比下降極顯著（P<0．01）； 5．與對照組比較，DEP3

6、．0ug/ul組和DEP12．0ug/ul組小鼠卵母細胞mtDNA的拷貝數(shù)（轉(zhuǎn)化成對數(shù)后）與對照組、DEP0．8ug/ul組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 復(fù)方當(dāng)歸中藥治療組：DEP染毒的小鼠上述情況均有不同程度改善，具體表現(xiàn)為： 1．各組間小鼠體重變化無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0．05）。復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組的卵巢濕重及卵巢臟器系數(shù)與相應(yīng)劑量DEP的模型組比較有顯著升高（P>0．01）； 2．電鏡下觀察可見：復(fù)

7、方當(dāng)歸高劑量治療組卵母細胞大部分線粒體腫脹及空泡化程度有所改善； 3．復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組小鼠卵巢組織中SOD含量、GSH含量顯著升高，MDA含量顯著降低（P<0．05）； 4．各染毒組對卵母細胞生發(fā)泡破裂沒有影響，復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組均可以明顯地增加小鼠體內(nèi)（0 h）卵母細胞第一極體釋放率（P<0．01）及降低卵母細胞退化率（P<0．01）。在受精24h后總體外受精率和培養(yǎng)48h后2-細胞以上胚胎卵裂率與相應(yīng)劑量DEP

8、的模型組相比升高極顯著（P<0．01）； 5．小鼠卵母細胞mtDNA的拷貝數(shù)（轉(zhuǎn)化成對數(shù)后），復(fù)方當(dāng)歸高劑量治療組與相應(yīng)劑量DEP的模型組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 結(jié)論： 1．本研究成功制作急性接觸柴油機尾氣顆粒損傷動物模型，有利于研究DEP、復(fù)方當(dāng)歸注射液對女性生殖系統(tǒng)的作用。 2．DEP具有生殖毒性，可對卵巢及卵母細胞均造成不同程度的損傷；同時小鼠體外受精情況隨DEP的含量的增加而減少

9、，由此可推斷DEP暴露對受孕有一定危害作用。 3．從中醫(yī)病因?qū)W來看，DEP這種環(huán)境污染致病因素可以看作一種“外邪”，作為一種致病因子直接損傷個體，造成臟腑生理功能的紊亂和臟腑氣血的失調(diào)，損及沖任，導(dǎo)致生殖功能障礙。 4．中藥能干預(yù)DEP的毒性，復(fù)方當(dāng)歸注射能對DEP所造成小鼠內(nèi)生殖器和卵母細胞的損傷有一定的拮抗和緩解作用，達到“扶正驅(qū)邪”的效果。由此推斷在DEP暴露的防治中適當(dāng)應(yīng)用復(fù)方當(dāng)歸注射液具有一定可行性，為中藥制劑