VEGF、FGF-2在喉癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：喉癌約占全身癌腫的1％-5％，在耳鼻咽喉的惡性腫瘤中，約占7.9％-35％。目前大量的基礎(chǔ)研究表明，血管的生成是實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。腫瘤微血管密度與其惡性表型及其生物學(xué)行為密切相關(guān)，如果沒(méi)有血管生成，大部分腫瘤處于休眠狀態(tài)，腫瘤維持微小狀態(tài)不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生生命威脅。而腫瘤組織微血管的生成是血管生長(zhǎng)因子和抑制因子失衡造成的，隨著對(duì)腫瘤研究的深入，對(duì)血管生長(zhǎng)因子和抑制因子的研究也越來(lái)越成為人們研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

2、（VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF-2）是血管生長(zhǎng)因子中與腫瘤血管生成關(guān)系最密切的因子。
　　 VEGF和FGF-2是促進(jìn)血管形成的重要因子，可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌集中蛋白酶和蛋白酶活化因子，從而導(dǎo)致血管基底膜的降解，細(xì)胞得以侵入周?chē)|(zhì)，遷移、增殖，最終分化而形成一個(gè)新的、含有一個(gè)空腔的血管。大量研究表明VEGF和FGF-2與促進(jìn)血管形成和促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)喉鱗狀細(xì)

3、胞癌組織中VEGF及FGF-2的表達(dá)，分析其中的相互關(guān)系，進(jìn)一步探討血管因子與喉癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、惡化的關(guān)系，為腫瘤的基因治療提供新的思路和方法。
　　 方法：
　　 1.材料：取材于2006年11月-2008年10月白求恩國(guó)際和平醫(yī)院和滄州市中心醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科住院手術(shù)治療的原發(fā)喉癌患者的新鮮癌組織50例及相應(yīng)40例癌旁組織（距腫瘤邊緣0.5cm），另取非喉部腫瘤手術(shù)患者的喉腔粘膜組織10例作為正常對(duì)照。所有組織取

4、材后立即用70％酒精固定，4℃冷藏保存。
　　 2.方法：流式細(xì)胞術(shù)（FCM）
　　 一抗：兔抗人IgG型FGF-2抗體，鼠抗人IgG2a型VEGF抗體：二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗體。單細(xì)胞懸液制備，細(xì)胞免疫熒光染色后，上機(jī)檢測(cè)。
　　 3.結(jié)果判定：VEGF及FGF-2表達(dá)的蛋白定量以熒光指數(shù)（FI）表示。公式如下：
　　 FI=試驗(yàn)樣品的均道值/對(duì)照樣品的均道值
　　 均道值=logX-M

5、odox340
　　 陽(yáng)性結(jié)果的判定：腫瘤組織的FI值大于正常組織的（）FI+2S為陽(yáng)性，（）FI-2S為陰性。（VEGF以FI>1.28為陽(yáng)性，F(xiàn)GF-2以FI>1.28為陽(yáng)性）。
　　 4.統(tǒng)計(jì)方法：所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excell數(shù)據(jù)庫(kù)整理，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析，t、t’檢驗(yàn)，x2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher精確計(jì)算和相關(guān)分析。以P≤0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，P≤0.01為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著性意

6、義。
　　 結(jié)果：
　　 1.VEGF的表達(dá)
　　 VEGF在喉癌組織中的表達(dá)量（FI=1.34±0.12），及陽(yáng)性表達(dá)率（62％）明顯高于癌旁組織（FI=0.94±0.12，12.5％）和正常喉粘膜組織（FI=1.00+0.14，0％），定量表達(dá)有非常顯著性意義（P=0.00）（P=0.0001），定性表達(dá)也有顯著性意義（P=0.002）（P=0.0002），喉癌組織中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁組織及正常喉

7、粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.949，P=0.5714）。
　　 N+組喉癌組織中VEGF的表達(dá)量（FI=1.36±0.07）和陽(yáng)性表達(dá)率（93.33％）與N0組（FI=1.1292±0.12，48.57％）相比，定量表達(dá)及陽(yáng)性表達(dá)率均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（t=7.11，P=0.000）（X2=8.9296，P=0.0028）；臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中VEGF的表達(dá)量（FI=1

8、.13±0.12）及陽(yáng)性表達(dá)率（43.75％）與臨床Ⅲ、Ⅳ期組（FI=1.3562±0.10，94.44％）相比，定量表達(dá)及陽(yáng)性表達(dá)率均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差（t=6.084，P=0.00）（X2=10.5064，P=0.0012），臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達(dá)量和陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組。VEGF在臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.FGF-2的表達(dá)
　　 FGF-2在喉癌組織中的表達(dá)量（FI=

9、1.28±0.08）及陽(yáng)性表達(dá)率（68％）與癌旁組織（FI=0.91±0.14，15％）和正常喉粘膜組織（FI=1.00±0.07，0％）相比，定量表達(dá)均有非常顯著性差異（P=0.000，P=0.000），定性表達(dá)也有顯著差異（X2=25.2810，P<0.0001）（P=0.00007），喉癌組織中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁組織及正常喉粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 有淋巴結(jié)

10、轉(zhuǎn)移（N+）組的喉癌組織中FGF-2的表達(dá)量（FI=1.215±0.32）和陽(yáng)性表達(dá)率（100％）與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N0）組（FI=1.09±0.25，54.29％）相比，定性表達(dá)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著差異（t=7.11，P=0.000），N+組中FGF-2的表達(dá)量明顯高于N0組，但陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.0091）。臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中FGF-2的表達(dá)量（FI=1.1349±0.19）及陽(yáng)性表達(dá)率（50％）與臨床Ⅲ、Ⅳ期組（

11、FI=1.3562±0.26）（100％）相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=6.084，P=0.000）（X2=13.2353，P=0.0003）。FGF-2在臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量及陽(yáng)性表達(dá)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.VEGF、FGF-2在喉癌組織中的定量及定性表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的表達(dá)無(wú)差別。
　　 2.VEGF、FGF-2在喉癌組織中表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及