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文檔簡介
1、目的:全氟辛烷磺酸(PFOS)是末端帶有磺?;倌軋F的全氟烴類化合物。碳氟鍵鍵能高使PFOS具有很高的熱、化學穩(wěn)定性,同時PFOS還具有疏水疏油的性質(zhì),因此被廣泛應用于民用和工業(yè)生產(chǎn)領域。但研究表明,PFOS具有持久性有機污染物的特點,即難降解性,生物蓄積性和遠距離遷移的特性。環(huán)境調(diào)查資料表明,目前全球范圍內(nèi)各類水體、土壤、大氣等環(huán)境介質(zhì)和生物體內(nèi)都已檢出PFOS污染,并且生物體內(nèi)的PFOS可通過食物鏈進行生物放大和累積,使得處于食物鏈
2、中高營養(yǎng)級的生物體內(nèi)具有高濃度的PFOS富積。人群調(diào)查資料顯示,全球范圍內(nèi)各國家人體血液中均檢測出PFOS污染。PFOS易于被機體吸收,主要分布在血清和肝臟。毒理學研究表明,PFOS可增高海馬神經(jīng)元細胞[Ca2+]i,降低血清甲狀腺激素水平,損害精子形成和成熟過程。因此PFOS的安全問題已引起各國政府部門、環(huán)境學家和毒理學家的廣泛關(guān)注。有文獻報道PFOS可增加細胞內(nèi)活性氧(ROS)濃度,破壞抗氧化防御系統(tǒng)。ROS是導致衰老的主要因素之一
3、,因此本實驗擬通過測定PFOS的靶器官—肝臟中氧化損傷相關(guān)指標、脂褐質(zhì)(LF)含量和P16基因表達,來初步探討PFOS是否具有促進衰老的作用。 方法:1.PFOS水溶液配制。設定各染毒組PFOS劑量,高劑量組15.0mg/L,中劑量組5.0mg/L,低劑量組1.7mg/L,配制PFOS濃度為各染毒劑量20倍的儲備液,臨用時稀釋到染毒劑量。1.動物分組和染毒。動物按體重隨機分為4組,對照組和低、中、高劑量組,每組6只。采用飲水染毒
4、,連續(xù)染毒90天,染毒期間自由進食。3.動物處理方式。染毒結(jié)束后,乙醚麻醉大鼠,心臟采血,處死,常規(guī)分離血清。分離肝臟,在生理鹽水中漂洗,用濾紙吸干,立即稱重,計算肝臟臟器系數(shù)。4.觀察指標與檢測方法:(1)體重監(jiān)測:染毒后每隔7天測一次體重。(2)肝臟臟器系數(shù)的測定:肝臟臟器系數(shù)=肝臟重量(g)/體重(g)×100%。(3)血清PFOS含量測定:固相萃取液相色譜質(zhì)譜聯(lián)機法(LC—MS法)測定。(4)組織蛋白含量檢測:雙縮脲法用分光光度
5、計測定。(5)丙二醛(MDA)含量檢測:硫代巴比妥酸法用分光光度計測定。(6)總抗氧化能力(T—AOC)檢測:應用組織中抗氧化物質(zhì)能使Fe3+還原成Fe2+,F(xiàn)e2+可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固絡合物的原理用分光光度計測定。(7)LF含量檢測:有機溶劑萃取法用熒光分光光度計測定。(8)P16 mRNA表達測定:RT-PCR法測定。(9)肝細胞周期檢測:流式細胞儀法測定。5.數(shù)據(jù)處理:所有結(jié)果用均值±標準差(x±s)表示,采用SPSS11.0統(tǒng)
6、計軟件對數(shù)據(jù)進行分析,多組均數(shù)間顯著性差異檢驗采用單因素方差分析??傮w比較差異有統(tǒng)計學意義時,若方差齊采用LSD法,方差不齊采用Dunnett T3法進行組間兩兩比較,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果:1.大鼠血清中PFOS濃度:血清PFOS濃度隨染毒劑量的增加而增加,并呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系(γ=0.996,P<0.05)。2.體重變化趨勢和肝臟臟器系數(shù):染毒期間,各實驗組大鼠體重逐漸增加,各染毒組大鼠體重與對照值相
7、比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。染毒90天后,肝臟重量和肝臟臟器系數(shù)隨染毒劑量的增加而增加,5.0和15.0mg/L染毒組肝臟重量和肝臟臟器系數(shù)均顯著高于對照值(P<0.05)。3.MDA、LF含量和T—AOC5.0和15.0mg/L染毒組大鼠肝臟中MDA含量和T—AOC與對照組比較,均顯著增高(P<0.05);15.0mg/L染毒組大鼠肝臟中LF含量顯著高于對照組(P<0.05),而其它染毒組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0
8、.05)。4.肝臟P16基因mRNA表達:1.7、5.0和15.0mg/L染毒組大鼠肝臟P16基因與β—actin基因條帶密度的比值與對照值相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。5.肝臟細胞周期:各染毒組大鼠肝臟G0-G1期、S期、G2—M期細胞百分比與對照值相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結(jié)論:1.PFOS飲水亞慢性染毒可以增加肝臟臟器系數(shù)。2.PFOS飲水亞慢性染毒可以引起肝臟氧化損傷,增加肝臟脂褐質(zhì)含量。3.PF
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