全氟辛烷磺酸對大鼠肝臟脂褐質(zhì)含量及P16基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：全氟辛烷磺酸(PFOS)是末端帶有磺?；倌軋F(tuán)的全氟烴類化合物。碳氟鍵鍵能高使PFOS具有很高的熱、化學(xué)穩(wěn)定性，同時(shí)PFOS還具有疏水疏油的性質(zhì)，因此被廣泛應(yīng)用于民用和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域。但研究表明，PFOS具有持久性有機(jī)污染物的特點(diǎn)，即難降解性，生物蓄積性和遠(yuǎn)距離遷移的特性。環(huán)境調(diào)查資料表明，目前全球范圍內(nèi)各類水體、土壤、大氣等環(huán)境介質(zhì)和生物體內(nèi)都已檢出PFOS污染，并且生物體內(nèi)的PFOS可通過食物鏈進(jìn)行生物放大和累積，使得處于食物鏈

2、中高營養(yǎng)級(jí)的生物體內(nèi)具有高濃度的PFOS富積。人群調(diào)查資料顯示，全球范圍內(nèi)各國家人體血液中均檢測出PFOS污染。PFOS易于被機(jī)體吸收，主要分布在血清和肝臟。毒理學(xué)研究表明，PFOS可增高海馬神經(jīng)元細(xì)胞[Ca2+]i，降低血清甲狀腺激素水平，損害精子形成和成熟過程。因此PFOS的安全問題已引起各國政府部門、環(huán)境學(xué)家和毒理學(xué)家的廣泛關(guān)注。有文獻(xiàn)報(bào)道PFOS可增加細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)濃度，破壞抗氧化防御系統(tǒng)。ROS是導(dǎo)致衰老的主要因素之一

3、，因此本實(shí)驗(yàn)擬通過測定PFOS的靶器官—肝臟中氧化損傷相關(guān)指標(biāo)、脂褐質(zhì)(LF)含量和P16基因表達(dá)，來初步探討PFOS是否具有促進(jìn)衰老的作用。 方法：1.PFOS水溶液配制。設(shè)定各染毒組PFOS劑量，高劑量組15.0mg/L，中劑量組5.0mg/L，低劑量組1.7mg/L，配制PFOS濃度為各染毒劑量20倍的儲(chǔ)備液，臨用時(shí)稀釋到染毒劑量。1.動(dòng)物分組和染毒。動(dòng)物按體重隨機(jī)分為4組，對照組和低、中、高劑量組，每組6只。采用飲水染毒

4、，連續(xù)染毒90天，染毒期間自由進(jìn)食。3.動(dòng)物處理方式。染毒結(jié)束后，乙醚麻醉大鼠，心臟采血，處死，常規(guī)分離血清。分離肝臟，在生理鹽水中漂洗，用濾紙吸干，立即稱重，計(jì)算肝臟臟器系數(shù)。4.觀察指標(biāo)與檢測方法：(1)體重監(jiān)測：染毒后每隔7天測一次體重。(2)肝臟臟器系數(shù)的測定:肝臟臟器系數(shù)=肝臟重量(g)/體重(g)×100％。(3)血清PFOS含量測定：固相萃取液相色譜質(zhì)譜聯(lián)機(jī)法(LC—MS法)測定。(4)組織蛋白含量檢測：雙縮脲法用分光光度

5、計(jì)測定。(5)丙二醛(MDA)含量檢測：硫代巴比妥酸法用分光光度計(jì)測定。(6)總抗氧化能力(T—AOC)檢測：應(yīng)用組織中抗氧化物質(zhì)能使Fe3+還原成Fe2+，F(xiàn)e2+可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固絡(luò)合物的原理用分光光度計(jì)測定。(7)LF含量檢測：有機(jī)溶劑萃取法用熒光分光光度計(jì)測定。(8)P16 mRNA表達(dá)測定：RT-PCR法測定。(9)肝細(xì)胞周期檢測：流式細(xì)胞儀法測定。5.數(shù)據(jù)處理:所有結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS11.0統(tǒng)

6、計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，多組均數(shù)間顯著性差異檢驗(yàn)采用單因素方差分析?？傮w比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，若方差齊采用LSD法，方差不齊采用Dunnett T3法進(jìn)行組間兩兩比較，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.大鼠血清中PFOS濃度：血清PFOS濃度隨染毒劑量的增加而增加，并呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系(γ=0.996，P<0.05)。2.體重變化趨勢和肝臟臟器系數(shù)：染毒期間，各實(shí)驗(yàn)組大鼠體重逐漸增加，各染毒組大鼠體重與對照值相

7、比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。染毒90天后，肝臟重量和肝臟臟器系數(shù)隨染毒劑量的增加而增加，5.0和15.0mg/L染毒組肝臟重量和肝臟臟器系數(shù)均顯著高于對照值(P<0.05)。3.MDA、LF含量和T—AOC5.0和15.0mg/L染毒組大鼠肝臟中MDA含量和T—AOC與對照組比較，均顯著增高(P<0.05)；15.0mg/L染毒組大鼠肝臟中LF含量顯著高于對照組(P<0.05)，而其它染毒組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

8、.05)。4.肝臟P16基因mRNA表達(dá)：1.7、5.0和15.0mg/L染毒組大鼠肝臟P16基因與β—actin基因條帶密度的比值與對照值相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5.肝臟細(xì)胞周期：各染毒組大鼠肝臟G0-G1期、S期、G2—M期細(xì)胞百分比與對照值相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：1.PFOS飲水亞慢性染毒可以增加肝臟臟器系數(shù)。2.PFOS飲水亞慢性染毒可以引起肝臟氧化損傷，增加肝臟脂褐質(zhì)含量。3.PF