鉀通道與SD大鼠前列腺上皮細(xì)胞增殖和凋亡關(guān)系的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察鉀通道開放劑(尼可地爾，Nicorandil)，鉀通道阻滯劑：四乙胺(TEA)、四氨基吡啶(4-AP)、格列本利(Glybenclamide，Glib)對(duì)體外培養(yǎng)SD大鼠前列腺上皮細(xì)胞增殖和凋亡中的調(diào)節(jié)作用。 方法：采用膠原酶消化SD大鼠前列腺組織建立原代SD大鼠前列腺上皮細(xì)胞株，采用特殊的前列腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基，角化蛋白(Pan-Keratin)免疫組織化學(xué)染色鑒定培養(yǎng)細(xì)胞，用第2～4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將SD大鼠前列腺上

2、皮細(xì)胞分為對(duì)照組、鉀通道阻斷劑組：四乙胺(TEA)、四氨基吡啶(4-AP)、格列本利(Glybenclamide，Glib)、開放劑(尼可地爾，Nicorandil)組，加入TEA(1、5、10mmol/L)、4-AP(1、5、10mmol/L)、Glib(10、50、100μmol/L)、Nicorandil(10μmol/L、25μmol/L、100μmol/L)，培養(yǎng)24、48、72h后，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，運(yùn)用MTT方法、Hoec

3、hst33258細(xì)胞核染色法和流式細(xì)胞儀(FCM)觀察傳代后細(xì)胞增殖和凋亡狀況。 結(jié)果：培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的上皮細(xì)胞形態(tài)特征，前列腺細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈典型的不規(guī)則鋪路石樣，其形態(tài)扁平不規(guī)則多角形，呈透明狀，細(xì)胞核不易觀察；細(xì)胞緊密相連，成片生長(zhǎng)，但細(xì)胞間不重疊。Pan-Keratin染色呈現(xiàn)棕黃色陽性，與對(duì)照組相比，MTT法和Hoechst33258染色法均顯示，TEA和4-AP的濃度隨著1、5、10 mmol/L遞增，Glib隨

4、著10、50、100μmol/L遞增，作用于細(xì)胞24、48、72h后，與對(duì)照組相比，前列腺上皮細(xì)胞有不同程度的增殖(P<0.01)，15mmol/L的鉀離子通道阻滯劑TEA顯著增加前列腺上皮細(xì)胞數(shù)(P<0.01)；Nicorandil隨著濃度的遞增，前列腺上皮細(xì)胞則有不同程度的凋亡，25μmol/L～100μmol/L的Nicorandil顯著減少前列腺上皮細(xì)胞數(shù)(P<0.01)，且FCM顯示：鉀離子通道阻滯劑作用于細(xì)胞的不同時(shí)間點(diǎn)的增

5、殖指數(shù)(PI)明顯高于鉀離子通道開放劑作用于細(xì)胞的不同時(shí)間點(diǎn)的增殖指數(shù)，鉀離子通道開放劑作用于細(xì)胞48h、72h后前列腺上皮細(xì)胞有明顯的凋亡峰，Hoechst33258染色法示細(xì)胞核固縮、裂解，呈現(xiàn)細(xì)胞明顯的凋亡形態(tài)特征。 結(jié)論：鉀離子通道對(duì)體外培養(yǎng)的SD大鼠前列腺上皮細(xì)胞增殖與凋亡狀態(tài)起重要的調(diào)節(jié)作用。3種類型的鉀離子通道阻滯劑作用于細(xì)胞隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)其細(xì)胞數(shù)逐漸增多，與對(duì)照組相比，有明顯的時(shí)間和劑量依賴性(P