前列腺毛細血管內(nèi)皮及腺上皮細胞的屏障功能研究.pdf

1、慢性前列腺炎是泌尿外科的常見病，多發(fā)病，有研究顯示35～50歲的男性一生中某個時候都會受到前列腺綜合征的影響。但是目前臨床上，藥物治療前列腺炎的效果很差，并且慢性前列腺炎的癥狀易反復(fù)出現(xiàn)，對患者的心理生理造成巨大的損害。目前慢性前列腺炎的發(fā)病機理及確切病因還未完全闡明。但是在臨床上前列腺液中一些抗菌藥物的濃度低于血漿，并且對于某些類型的慢性前列腺炎患者來講，其前列腺間質(zhì)存在明顯的炎癥而前列腺液中不出現(xiàn)白細胞的情況。因此一些學(xué)者通過研究后

2、提出，在人體前列腺組織與血液循環(huán)之間可能存在一種特殊的屏障機制。目前的研究也認為，藥物在前列腺組織的濃度低于血漿的原因，可能是因為血前列腺屏障的存在。因此對于血前列腺屏障的研究對前列腺疾病的治療及其發(fā)病機制的研究具有非常重要的意義。對于機體已經(jīng)證實的血腦屏障來講，血腦屏障的選擇通透特性主要由毛細血管內(nèi)皮細胞維持。中樞神經(jīng)系統(tǒng)在形成的過程中，毛細血管內(nèi)皮細胞通過通過自身的成熟并與周圍組織形成特殊的結(jié)構(gòu)從而形成血腦屏障，毛細血管內(nèi)皮細胞的生

3、物化學(xué)特性決定血腦屏障的滲透特性，并且這種滲透性也會隨著這些血管直徑的增加而增加。同樣對于血眼屏障與血迷路屏障有研究指出毛細血管內(nèi)皮細胞不存在窗孔，為連續(xù)性內(nèi)皮，同時被緊密連接蛋白聯(lián)合，是這些屏障結(jié)構(gòu)的主要組成。關(guān)于前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞在血前列腺屏障中的作用，有研究發(fā)現(xiàn)前列腺微血管內(nèi)皮細胞也為連續(xù)性內(nèi)皮，同時跨細胞途徑的吞飲囊泡較少，在結(jié)構(gòu)功能方面與血腦屏障，血睪屏障及血附睪屏障相似，提示前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞可能參與了血前列腺屏障的

4、組成。對于前列腺腺上皮細胞，有研究發(fā)現(xiàn)，屏障抗原EBA，作為血腦屏障的標志，在雄性動物的生殖系統(tǒng)，存在于血睪屏障、血附睪屏障內(nèi)。而且經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)EBA在前列腺上皮細胞同樣表達活躍，同樣馬文強等的研究也顯示前列腺上皮也連續(xù)性表達屏障抗原EBA。生物體的基因是有限的，前列腺腺上皮細胞胞漿連續(xù)性表達EBA抗原，從分子水平提示前列腺腺上皮細胞可能在血前列腺屏障的選擇通透性方面發(fā)揮重要的作用。
　　目的：
　　采用細胞生長特性選擇法分離

5、培養(yǎng)大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，體外培養(yǎng)大鼠前列腺腺上皮細胞株，體外研究大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞的屏障功能，并建立大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞的共培養(yǎng)模型，建立血前列腺屏障的體外模型，為以后血前列腺屏障的研究及前列腺疾病的治療提供方法。
　　方法：
　　1.采用細胞生長特性選擇法分離培養(yǎng)大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，采用光鏡電鏡進行形態(tài)學(xué)鑒定，并用第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體對分離培養(yǎng)的前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞進

6、行免疫學(xué)鑒定。
　　2.體外培養(yǎng)大鼠前列腺上皮細胞株，并建立前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞的共培養(yǎng)模型。免疫組化觀察毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞之間緊密連接蛋白claudin-1的表達，并采用光鏡電鏡觀察毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞的結(jié)構(gòu)。
　　3.采用跨膜電阻測量儀檢測毛細血管內(nèi)皮細胞，腺上皮細胞及共培養(yǎng)模型的跨膜電阻，用酚紅滲漏實驗檢測三種模型的通透性，并以大鼠腦毛細血管內(nèi)皮細胞及肺毛細血管內(nèi)皮細胞做為陽性及陰性對照

7、。
　　結(jié)果：
　　1.成功分離了大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞在體外培養(yǎng)可以形成緊密的單層細胞結(jié)構(gòu)，呈鋪路石樣生長。免疫熒光結(jié)果顯示，第Ⅷ因子相關(guān)抗原表達于分離培養(yǎng)的大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞胞漿，提示分離的細胞為毛細血管內(nèi)皮細胞;
　　2.免疫組化結(jié)果顯示，相鄰的毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞之間表達緊密連接蛋白claudin-1;電鏡結(jié)果顯示緊密連接存在于相鄰的毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞之間。

8、
　　3.成功建立了大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞及腺上皮細胞的共培養(yǎng)模型，體外培養(yǎng)的大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，腺上皮細胞，共培養(yǎng)模型，腦毛細血管內(nèi)皮細胞及肺毛細血管內(nèi)皮細胞的跨膜電阻峰值可以達到142.2±3.1Ω/cm2，201.3±3.5Ω/cm2，223±2.3Ω/cm2，248.20±6.2Ω/cm2，43.3±3.5Ω/cm2左右，酚紅滲漏實驗顯示，前列腺毛細血管，腺上皮，共培養(yǎng)模型，腦毛細血管內(nèi)皮細胞隨著細胞單層跨膜電

9、阻的增加，基底側(cè)的酚紅濃度減低，而大鼠肺毛細血管內(nèi)皮細胞基底側(cè)酚紅濃度隨跨膜電阻的變化趨勢不明顯。
　　結(jié)論：
　　1.根據(jù)細胞的生長特性選擇法可以成功分離培養(yǎng)大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，該方法具有操作簡單，無機械性及化學(xué)性損傷等優(yōu)點。
　　2.大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮細胞，腺上皮細胞具有與腦毛細血管內(nèi)皮細胞等屏障內(nèi)皮相似的結(jié)構(gòu)功能。體外培養(yǎng)的大鼠前列腺毛細血管內(nèi)皮及腺上皮細胞具有一定程度的屏障特性，提示前列腺毛細血管內(nèi)