超聲聯(lián)合微泡開放血-前列腺屏障的研究.pdf

1、前列腺疾病是男性臨床男性的多發(fā)病，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。據(jù)報道，50歲以上的男性人群中，約70％男性患有各種前列腺疾病，包括前列腺炎、前列腺增生及前列腺癌。臨床實踐及科學(xué)研究均提示前列腺組織具有一定的生物屏障結(jié)構(gòu)，一方面隔絕外來有害物質(zhì)對前列腺的損害，另一方面，也阻擋了藥物進入前列腺組織。 目前認(rèn)為，前列腺腺體組織的纖維肌性間質(zhì)層、腺泡上皮脂質(zhì)層等構(gòu)成了前列腺的屏障結(jié)構(gòu)，加之血管分布在前列腺纖維間質(zhì)外側(cè)的特殊解剖結(jié)構(gòu)，藥物難以

2、通過此屏障達到治療前列腺疾病的有效濃度。在慢性前列腺炎的情況下，由于前列腺囊胞周圍纖維化、膿腔周圍組織纖維化及纖維間質(zhì)明顯增生，其屏障作用更為突出。在藥物選擇上，水溶性、酸性、解離常數(shù)低及蛋白結(jié)合率高的抗菌藥物均不易透過血一前列腺屏障，因此在前列腺疾病的用藥上受到很大的限制，且療效欠佳，給龐大的患者人群和公共衛(wèi)生事業(yè)造成了極大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。因此，如何提高前列腺組織通透性，探索新的藥物治療途徑是目前前列腺疾病治療的研究重點。 研究目

3、的： 1、采用第三軍醫(yī)大學(xué)附屬新橋醫(yī)院超聲科自行研發(fā)的新型脈沖式超聲治療儀，應(yīng)用單純微泡、單純超聲輻照及超聲聯(lián)合造影劑微泡輻照的方法對40只新西蘭兔前列腺進行治療，切片HE染色光學(xué)顯微鏡下檢測治療后兔前列腺腺體組織及細胞的病理改變；使用透射式電子顯微鏡觀察各組前列腺細胞及細胞間連接結(jié)構(gòu)的超微變化。 2、以伊文思藍為示蹤劑，通過熒光顯微鏡觀察治療后各組伊文思藍溶液漏出在前列腺組織分布的差異；制作伊文思藍定量標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方

4、程定量分析各組前列腺組織治療后的伊文思藍濃度以反映前列腺經(jīng)不同處理后通透性的差別。 3、TUNEL法觀察各實驗方法對于兔前列腺腺體上皮細胞凋亡表達水平的影響。 材料與方法：40只健康8月齡性成熟新西蘭大白兔，隨機分為2大組，每組各20只。 1.第1大組依方法一處理，分別分為單純超聲組（US）、單純微泡組（MB）、超聲聯(lián)合微泡輻照組（US+MB）及空白對照組（CO）。開腹充分暴露前列腺前方的精囊，經(jīng)耳緣靜脈注射2％

5、伊文思藍（EB）后，注射微泡造影劑，同時經(jīng)精囊輻照其后方的兔前列腺10分鐘，US組僅作單純超聲輻照10分鐘，MB組只注射5mL“脂氟顯”微泡懸液，CO組僅注射生理鹽水5mL。術(shù)后經(jīng)腹主動脈灌注，取前列腺并作冰凍切片，熒光顯微鏡觀察EB在前列腺組織中的滲漏；檢測EB甲酰胺溶液的最大吸收峰值并測量梯度濃度EB溶液的光密度值回歸出EB－光密度值曲線及回歸方程，以3mL甲酰胺溶液萃取出實驗兔前列腺組織中的EB并測量其光密度值（OD），代入回歸方

6、程求得EB漏出總量及前列腺組織中EB濃度。 2.第2大組按方法二處理，分組、治療同上法，但不注射伊文思藍及肝素化生理鹽水灌注。術(shù)后取前列腺切片作HE染色、透射式電子顯微鏡觀察超聲及超聲聯(lián)合微泡及單純微泡對兔前列腺的超微結(jié)構(gòu)的影響；前列腺標(biāo)本作TUNEL染色并統(tǒng)計各組前列腺細胞凋亡指數(shù)（AI）以考察其對前列腺細胞凋亡表達水平的影響。 結(jié)果：US組、MB組、US+MB組及CO組前列腺冰凍切片內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)紅色EB熒光分布；經(jīng)蘇木

7、素復(fù)染后可見US+MB組部分腺腔內(nèi)出現(xiàn)紅色EB熒光，而US、MB及CO組紅色熒光僅分布于前列腺周邊及間質(zhì)的纖維組織中，腺腔內(nèi)均紅色EB熒光。 全波長掃描，發(fā)現(xiàn)EB甲酰胺溶液在625nm波長處具有最大吸收峰，根據(jù)梯度濃度EB溶液在625nm測得的OD值得出回歸方程y=12.569X+0.120（y為EB濃度，X為OD值，F(xiàn)=3795.2，決定系數(shù)R2=0.998），各組測得OD值代入回歸方程求得US+MB組前列腺EB平均濃度10.

8、385±0.790μg/g、US組為6.706±0.312μg/g、MB組6.258±0.352μg/g，CO組6.099±0.508μg/g，US+MB組與其余各組兩兩比較均有顯著差異，說明US+MB組前列腺EB濃度明顯高于其余各組，US組與船及CO組EB濃度均值皆有一定差異，但差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 US、MB、CO組兔前列腺組織在光鏡下均未見明顯異常，胞漿、細胞核染色均勻，腺體上皮組織排列整齊、完整，腺腔內(nèi)未見特殊，US

9、+MB組前列腺腺體細胞胞漿、細胞核等在光鏡下均未見明顯異常，但腺體上皮組織排列紊亂，細胞間結(jié)構(gòu)松散，腺腔內(nèi)可見大量嗜伊紅染的液體；MB組及CO組前列腺組織TUNEL染色光鏡下僅見稀少黃褐色陽性細胞，US組對比MB組，TUNEL染色陽性細胞數(shù)目明顯增加，US+MB組TUNEL陽性細胞光鏡下呈分布密集；各組AI值統(tǒng)計，CO組為5.800±1.241％，MB組為6.420±2.454％、US組為30.780±4.634％、US+MB組為42.

10、636±2.430％，US+MB組與其余各組間AI值兩兩比較，P均<0.01，說明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，即US+MB組AI明顯高于其余各組，而US組則明顯高于MB及CO組，MB組與CO組AI均值未見顯著差異。 CO、MB組前列腺組織在透射電鏡下可見腺體細胞分泌活躍，腺腔內(nèi)及細胞內(nèi)均可見大量分泌顆粒，線粒體腫脹，細胞間的緊密連接形態(tài)正常；US則腺體細胞活動明顯降低，細胞器及分泌顆粒均明顯減少，細胞間緊密連接擴張，部分呈囊狀擴張；U

11、S+MB組可見大量細胞崩解、破壞，腺腔塌陷。 結(jié)論： 1.一定強度的脈沖式超聲輻照可通過空化作用提高前列腺組織、細胞的通透性，從而打開前列腺屏障。 2.脈沖式超聲聯(lián)合一定濃度的造影劑微泡輻照可有效增強超聲開放兔前列腺血管管壁上皮到前列腺腺管上皮組織間的屏障結(jié)構(gòu)，從而提高了兔前列腺的通透性從而提高了藥物、大分子物質(zhì)穿透前列腺的能力。 3.超聲聯(lián)合微泡開放血－前列腺屏障的機制主要為：超聲波導(dǎo)致微泡在管腔中發(fā)生