重組干擾素誘導(dǎo)蛋白-10對(duì)人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究.pdf

1、背景與目的：
　　糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy,DR）、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞（central retinal vein occlusion,CRVO）、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（retinopathy of prematurity,ROP）等多種視網(wǎng)膜相關(guān)疾病與新生血管的發(fā)生有密切聯(lián)系。當(dāng)這些新生血管發(fā)生滲漏、出血、纖維增生而造成視網(wǎng)膜水腫、視網(wǎng)膜玻璃體出血或牽引視網(wǎng)膜脫離時(shí)，則可以導(dǎo)致視力下降或喪失。血管新生

2、是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過程，由已形成的血管內(nèi)皮細(xì)胞沖破血管壁的基底膜，遷移、增殖和連接組成新的血管。一些研究結(jié)果表明，重組干擾素誘導(dǎo)蛋白-10（interferon-inducible protein-10,IP-10）能夠與CXC趨化因子受體3（chemokine receptor 3,CXCR3）結(jié)合發(fā)揮抗血管作用，并且人的多種血管內(nèi)皮細(xì)胞均不同程度地表達(dá)CXCR3。IP-10抑制視網(wǎng)膜新生血管生成作用已有報(bào)道，但對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞作用的具體機(jī)制

3、目前尚不清楚。本研究旨在通過檢測(cè)IP-10對(duì)人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（human retinal microvascular endothelial cells,HREC）增殖、遷移和管腔形成能力的影響，并以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）作為參照，探討其抑制視網(wǎng)膜新生血管生成的途徑及特異性作用，以期對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的研究提供新的理論依據(jù)及治療靶點(diǎn)。

4、　　材料與方法：
　　1、常規(guī)消化HREC和HUVEC，分別收集約1×106個(gè)細(xì)胞，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法檢測(cè)兩種細(xì)胞CXCR3 mRNA的表達(dá)情況。
　　2、分別收集HREC和HUVEC，調(diào)整細(xì)胞濃度至5000個(gè)/100μl，以每孔100μl接種于96孔板，以不同濃度IP-10（0，10，100,1000ng

5、/ml）作用于孔內(nèi)細(xì)胞24h后，每孔加入CCK810μl，37℃，5%CO2孵育箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h后，酶聯(lián)檢測(cè)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（OD值）。
　　3、HREC和HUVEC兩種細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，移液槍尖垂直培養(yǎng)板劃痕，及時(shí)拍照。設(shè)置3個(gè)IP-10濃度組，干預(yù)24 h后再次拍照，軟件測(cè)量計(jì)算細(xì)胞加藥前后遷移距離。
　　4、根據(jù)IP-10濃度分成0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml組及1000ng/ml4個(gè)組，Ma

6、trigel體外三維成型法檢測(cè)IP-10對(duì)HREC和HUVEC管腔形成能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，HREC和HUVEC兩個(gè)細(xì)胞株均在基因水平表達(dá)IP-10受體CXCR3。
　　2、CCK-8增殖分析法結(jié)果顯示IP-10抑制HREC增殖，在0~1000ng/ml范圍隨濃度增加增殖抑制率有上升趨勢(shì)（F=6.202，P<0.05），各濃度對(duì)HUVEC的增殖均無(wú)明顯影響（F=1.183，P>0.

7、05）。
　　3、細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)中IP-10在劑量10ng/ml和100ng/ml干預(yù)時(shí)，HREC和HUVEC遷移距離均小于對(duì)照組的遷移距離，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=25.373，P<0.05；F=23.858，P<0.05）。
　　4、Matrigel體外三維成型實(shí)驗(yàn)中，10、100ng/ml IP-10對(duì)HREC完整管腔形成數(shù)量無(wú)明顯影響，1000ng/ml IP-10可使HREC完整管腔形成數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意