苯磷硫胺對(duì)體外高糖培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：研究苯磷硫胺(Benfotiamine)對(duì)體外高糖環(huán)境中培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)及細(xì)胞凋亡的影響。為探討苯磷硫胺對(duì)體外高糖環(huán)境中培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)理提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。取第4-6代細(xì)胞分成三大組，均培養(yǎng)于含30mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基中。每大組又分成五個(gè)小組，分別給予五種不同濃度的苯磷硫胺(0、25μmol/L、50μmol/L、7

2、5μmol/L、10μmol/L)，三個(gè)大組的細(xì)胞分別在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)。1.采用MTT法觀察不同濃度的苯磷硫胺對(duì)高糖培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖的影響。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)8次，對(duì)同組不同濃度所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；對(duì)比觀察并分析三個(gè)不同培養(yǎng)時(shí)段的結(jié)果，對(duì)不同時(shí)間組而同濃度的數(shù)據(jù)進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。選取有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的最小的濃度。2.用流式細(xì)胞分析技術(shù)觀察選定濃度的苯磷硫胺對(duì)高糖環(huán)境中培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜

3、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡的影響。 結(jié)果：MTT法顯示，一定濃度的苯磷硫胺可以降低高糖對(duì)牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，且呈劑量相關(guān)。在濃度為75μmol/L時(shí)OD值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＜0.01)。但苯磷硫胺對(duì)牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用與時(shí)間之間的關(guān)系無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。流式細(xì)胞分析技術(shù)顯示，75μmol/L的苯磷硫胺可明顯減少牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。 結(jié)論：一定濃度的苯磷硫胺對(duì)體外高糖環(huán)境中培養(yǎng)