腫瘤抑素對恒河猴脈絡膜—視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞生長影響的實驗研究.pdf

1、分類號：R774密級：學位類別：科學學位口專業(yè)學位團。學校代碼：10062學號：2010602606學科門類：醫(yī)學又肄眚斜矢鼉碩士學位論文MLASTER’SDISSERTATIoN論文題目：腫瘤抑素對恒河猴脈絡膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞生長影響的實驗研究TITLE：TheexperimentalresearchoftumstatinonGrowthofmonkeychoroid—retinalendothelialcells一級學科：臨床醫(yī)學

2、二級學科：眼科學論文作者：趙一璇指導教師：張紅教授導師組成員：孫靖博士孫巖博士天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要研究背景流行病學研究表明，隨著感染性眼病控制，新生血管性眼病己成為發(fā)達國家失明的重要原因，而視網(wǎng)膜新生血管(retinalneovascularization，RNV)性疾病是目前主要的致盲眼病，但目前的治療效果均不理想。新生血管的生成是血管內(nèi)皮細胞不斷分裂增殖和遷移的復雜過程，目前用于治療研究

3、的藥物主要有血管生成因子表達的抑制劑如抗VEGF抗體和內(nèi)源性血管生成抑制因子如內(nèi)皮抑素(Endostatin，ES)等，腫瘤抑素是迄今發(fā)現(xiàn)活性最強的內(nèi)源性血管生成抑制因子，對病理性新生血管生成有明顯抑制作用。目的構(gòu)建及鑒定經(jīng)信號肽優(yōu)化后帶有HAtag標記的攜帶人腫瘤抑素(Tumstatin)活性片段Tum5基因真核表達載體并研究抗腫瘤血管生成抑制基因Tum5對恒河猴脈絡膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞(rhesuschoroidoretinalen

4、dothelialcell，P強／SA)生長的影響。方法本研究包括兩部分：1設計并構(gòu)建經(jīng)信號肽優(yōu)化后帶有HAtag標記的攜帶Tum5重組基因真核表達載體PCMVTum5MCS，通過酶切、測序驗證Tum5基因構(gòu)建情況；2利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染系統(tǒng)將PCMVTum5MCS質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染入體外培養(yǎng)的RF／6A細胞(轉(zhuǎn)染實驗組)，同時設置空質(zhì)粒載體陰性對照組和未轉(zhuǎn)染組；采用Dotblot方法用HA抗體檢測細胞上清液中Tu

5、m5蛋白的表達水平；通過MTT法檢測細胞轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h三個不同時相點細胞增殖抑制率；利用體外細胞劃痕試驗，分別考察在Oh、24h、48h三個不同時相點，Tum5與RF／6A遷移與侵襲的關(guān)系；運用流式細胞術(shù)比較三組細胞轉(zhuǎn)染48h后細胞周期情況。結(jié)果1經(jīng)過酶切，測序鑒定PCMVTum5MCS真核表達載體構(gòu)建成功；2瞬時轉(zhuǎn)染Tum5載體構(gòu)建成功；3Dotblot法檢測出Tum5基因在RF／6A細胞上清中蛋白表達成陽性；4轉(zhuǎn)染后2