淫羊藿和冬凌草應(yīng)用基礎(chǔ)研究.pdf

1、天然產(chǎn)物化學(xué)的目的和方向是尋找活性化合物、活性化合物配伍組合及其合適的生產(chǎn)制作方法，本文就淫羊藿有效部位黃酮醇苷的化學(xué)成分、生產(chǎn)工藝和HPLC-NMR指紋圖譜以及冬凌草制作進(jìn)行了深入研究。 一、淫羊藿應(yīng)用基礎(chǔ)研究 淫羊藿為常用中藥之一，味辛甘、性溫，入肝、腎二經(jīng)，具有補(bǔ)。腎壯陽、祛風(fēng)除濕之功效。淫羊藿主要含有8位具異戊烯基(及其衍生基團(tuán))取代的黃酮醇及其苷類化合物，實(shí)驗(yàn)證明其具有提高免疫系統(tǒng)功能、改善心腦血管系統(tǒng)功能、改

2、善生殖系統(tǒng)功能等功效。國內(nèi)外已在淫羊藿的化學(xué)成分、藥理作用、藥用植物新資源以及質(zhì)量評價(jià)方面作了大量工作，但在淫羊藿有效部位系統(tǒng)工藝以及指紋圖譜和化學(xué)成分NMR解析等應(yīng)用基礎(chǔ)方面作得工作較少；另外，目前僅對50余種淫羊藿屬植物的20種進(jìn)行了化學(xué)成分研究，而且實(shí)際上隨著產(chǎn)地的不同，同種淫羊藿的次生代謝成分類型也會(huì)有較大的變化。因此，有必要繼續(xù)對淫羊藿進(jìn)行深入細(xì)致的應(yīng)用基礎(chǔ)研究。 本論文對丹東產(chǎn)朝鮮淫羊藿有效部位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究。

3、利用硅膠柱層析進(jìn)行分離，根據(jù)化合物的光譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。從朝鮮淫羊藿大孔樹脂處理物中分離得到了8個(gè)化合物，分別鑒定為：3．羥基-2-甲基-4-吡喃酮、淫羊藿次苷Ⅱ、3′′′-羰基-2″-β-L-奎諾糖基淫羊藿次苷Ⅱ、朝藿定K、淫羊藿苷、Epimedokoreanoside Ⅰ、朝藿苷A和3′′′-羰基-2″-β-L-奎諾糖基淫羊藿苷，其中，3′′′-羰基-2″-β-L-奎諾糖基淫羊藿次苷Ⅱ和3′′′-羰基-2″-β-L-奎諾糖基淫羊藿苷

4、為新化合物，其糖基(2″-β-L-奎諾糖基)為新骨架。3-羥基-2-甲基-4-吡喃酮為首次從該植物中分離得到。在此基礎(chǔ)上對其特征提取物HPLC-NMR(<'13>CNMR，<'1>HNMR)指紋圖譜的建立方法進(jìn)行了探討，并推算出了HPLC-<'13>CNMR和HPLC-<'1>H NMR計(jì)算公式，已知淫羊藿苷含量(HPLC測定)，從定量<'13>CNMR或<'1>HNMR可直接計(jì)算出其他主要成分的含量。 本論文對日本三菱HP20

5、和SP825大孔吸附樹脂進(jìn)行了優(yōu)選，最終采用日本三菱HP20大孔吸附樹脂和硅膠柱層析分離純化朝鮮淫羊藿，并優(yōu)化了HP20大孔吸附樹脂和硅膠柱層析分離純化朝鮮淫羊藿總黃酮的工藝條件及樹脂前處理的方法；通過一步硅膠柱層析，可將有效部位中淫羊藿苷的純度提高一倍以上。通過HP20大孔吸附樹脂柱和硅膠柱，可得到不同收率和不同淫羊藿甘含量的系列產(chǎn)品。采用HPLC法測定雙指標(biāo)淫羊藿苷(主要成分)和淫羊藿次苷II(較主要成分，保留時(shí)間最長)含量，建立了

6、淫羊藿苷相關(guān)的HPLC-NMR指紋圖譜(其中<'13>CNMR定量指紋圖譜為國內(nèi)外首創(chuàng))，對確保產(chǎn)品質(zhì)量將發(fā)揮重要保障作用。朝鮮淫羊藿中成分極其復(fù)雜，但經(jīng)過分離提純的有效部位成分較純，質(zhì)量指標(biāo)可控，量效關(guān)系明確，療效穩(wěn)定。本論文首次研究了光葉淫羊藿全草的化學(xué)成分，為闡明其有效成分提供根據(jù)。利用硅膠柱層析進(jìn)行分離，根據(jù)化合物的光譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。從光葉淫羊藿根、莖中分離得到了8個(gè)化合物，分別鑒定為：(7S,8R，8′R)-3，3′-二甲氧

7、基-4,4′-二羥基-9-乙酰氧基-7,9-環(huán)氧木脂素、胡蘿卜苷、淫羊藿次苷C、2″-鼠李糖大花淫羊藿苷A、淫羊藿苷、淫羊藿次甘A、朝藿定C和柔藿苷；從光葉淫羊藿葉中分離得到了4個(gè)化合物，分別鑒定為：川藿苷A、Thalictoside、Icarside D<,2>和山奈苷，所有12個(gè)化合物均為首次從該植物中分離得到。其中，化合物(7S,8R，8′R)-3,3'-二甲氧基-4，4’-二羥基-9-乙酰氧基-7,9-環(huán)氧木脂素糾正了原文獻(xiàn)中的

8、結(jié)構(gòu)表達(dá)，本文還分別對該化合物和量大的抗HW活性化合物川藿苷A進(jìn)行了<'1>H和<'13>C MNR檢測，通過DEPT和<'1>H-<'1>H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等2DNMR技術(shù)對其所有的<'1>H和<'13>C NMR信號進(jìn)行了全歸屬和詳細(xì)解析。 本論文還對從不同種淫羊藿中分離得到的三種黃酮化合物(淫羊藿次苷、淫羊藿苷和朝藿定C)分別進(jìn)行了<'1>H和<'13>C MNR檢測，通過DEPT和<'1>H-<

9、'1>H COSY、HSQC、HMBC等2D NMR技術(shù)對其所有的<'1>H和<'13>C NMR信號進(jìn)行了全歸屬和詳細(xì)解析；研究了這3種黃酮化合物連接的異同，綜合了該類化合物的基本波譜學(xué)特征，著重補(bǔ)充了報(bào)道較少的糖取代基和糖上羥基的<'1>HNMR數(shù)據(jù)，總結(jié)了前期文獻(xiàn)中未注意到的NMR數(shù)據(jù)規(guī)律，糾正了前期文獻(xiàn)中存在的錯(cuò)誤。 二、冬凌草應(yīng)用基礎(chǔ)研究 冬凌草系唇形科香茶菜屬植物，味甘苦，性微寒，具清熱解毒、消炎止痛、健胃活

10、血及抗腫瘤之功效。冬凌草富含對映．貝殼杉烷類二萜化合物，其中冬凌草甲素為其最主要成分。冬凌草甲素具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，對多種移植性腫瘤有效，臨床上用于食管癌、肝癌的治療取得了一定的療效。但由于冬凌草甲素水溶性差，生物半衰期短，到目前為止尚未研究出理想的靶向制劑。本文首先采用簡單易行的工藝方法，對活性炭處理過乙醇提取物直接上硅膠柱，石油醚一丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，再采用分步結(jié)晶法，即可得到大量純度高的冬凌草甲素，大量冬凌草甲素的獲得為下一步脂質(zhì)

11、體的制作打下了良好的基礎(chǔ)。我們還在分離冬凌草甲素過程中得到了另外8個(gè)化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇、齊墩果酸、熊果酸、冬凌草乙素、rabdoternin A、rabdoternin B、wikstroemioidin B和lasiodonin acetonide：其中，lasiodonin acetonide為新的對映-貝殼杉烯型二萜化合物。 本文采用了國際上先進(jìn)的脂質(zhì)體制備技術(shù)和分析方法(依照Hope等發(fā)表的擠壓法制備大單室脂