陜西五地土樣中昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌殺蟲(chóng)殺菌活性菌株篩選及鑒定.pdf

1、昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌是存在于昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)腸道內(nèi)的菌革蘭氏陰性菌，屬腸桿菌科細(xì)菌Enterobacteriaceae，共包含致病桿菌屬Xenorhabdus和發(fā)光桿菌屬Photorhabdus，分別與斯氏線蟲(chóng)Steinernematidae和異小桿線蟲(chóng)Heterorhabditidae共生。昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌能產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，在醫(yī)療衛(wèi)生和農(nóng)業(yè)上具有抑菌、殺蟲(chóng)、殺線蟲(chóng)、抗?jié)?、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性。國(guó)內(nèi)對(duì)昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌的研究較少

2、，主要集中在從國(guó)外引種、保種等工作上，關(guān)于昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌的分離鑒定工作的研究還不夠深入。本研究從陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺(tái)5地采集土樣500份，分離其中昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)，篩選昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌，在對(duì)共生菌的生物活性研究基礎(chǔ)上，確定了其種屬分類地位，研究得到如下主要結(jié)果： 1、對(duì)采自陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺(tái)等5地的500份土樣中的線蟲(chóng)系統(tǒng)篩選結(jié)果表明，土樣線蟲(chóng)含有率為95.6％，研究發(fā)現(xiàn)線蟲(chóng)的分布與土壤質(zhì)地、土壤

3、濕度、土壤肥沃程度、植被、當(dāng)?shù)丶闹骷凹竟?jié)等因素有關(guān)；分離得到2種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)；從2種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)中篩選到2株共生菌，1株為Ⅰ型共生菌，1株為Ⅱ型共生菌，Ⅰ型共生菌為目標(biāo)菌株，命名為T(mén)B。 2、對(duì)菌株TB的殺蟲(chóng)殺菌生物活性進(jìn)行了較為系統(tǒng)研究。(1)殺菌活性。在離體條件下，采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定了TB菌株發(fā)酵液對(duì)11種病原真菌的生長(zhǎng)抑制作用，TB菌株發(fā)酵液在稀釋10倍的條件下，對(duì)11種植物病原真菌有不同程度的抑菌活性，其中對(duì)辣椒疫霉病菌

4、、番茄灰霉病菌和小麥紋枯病菌的抑制作用最強(qiáng)，抑制率分別為99.99％、99.11％和99.99％；采用孢子萌發(fā)法測(cè)定昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌發(fā)酵液對(duì)番茄灰霉孢子萌發(fā)的抑制作用，實(shí)驗(yàn)表明TB菌株發(fā)酵液對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)有推遲作用?；铙w實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對(duì)小麥白粉病的保護(hù)效果達(dá)到43.8％，治療效果為30.6％。(2)殺蟲(chóng)活性測(cè)定表明，TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對(duì)粘蟲(chóng)和小菜蛾無(wú)明顯觸殺、胃毒活性，但對(duì)5齡粘蟲(chóng)具有較強(qiáng)的血腔毒性，在

5、每頭注射10μL的劑量下，對(duì)5齡粘蟲(chóng)的致死率為90％。 3、運(yùn)用形態(tài)學(xué)、生理生化指標(biāo)測(cè)定、分子生物學(xué)等方法對(duì)菌株TB進(jìn)行了鑒定。形態(tài)觀察和生理生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果可初步推斷TB菌株為致病桿菌屬(Xenorhabdus)細(xì)菌；經(jīng)PCR擴(kuò)增TB菌株的16SrDNA，測(cè)得16SrDNA的全序列長(zhǎng)度為1536個(gè)堿基，利用DNAMAN5.2.2軟件的MultipleSequenceAlignment進(jìn)行多序列同源性分析，采用鄰接法構(gòu)建了TB菌