余甘子葉抗癌化學成分誘導人肝癌細胞株凋亡及機制研究.pdf

1、目的：通過對余甘子葉抗癌化學成分沒食子酸、沒食子酸乙酯及沒食子酸、沒食子酸乙酯混合物誘導人肝癌細胞株 BEL-7404凋亡和相關凋亡基因蛋白Bax與Bcl-2表達的研究，探討余甘子葉抗癌化學成分誘導人肝癌細胞株BEL-7404凋亡的分子機制。
　　方法：采用MTT法和細胞集落形成法體外測定余甘子葉抗癌化學成分對人肝癌細胞株 BEL-7404增殖的影響；普通光學顯微鏡、倒臵顯微鏡和熒光顯微鏡觀察余甘子葉抗癌化學成分作用人肝癌細胞株B

2、EL-7404后的形態(tài)學變化；AnnexinV/PI雙標記法流式細胞術檢測誘導人肝癌細胞株 BEL-7404早期凋亡的情況；原位末端標記法檢測誘導人肝癌細胞株 BEL-7404的晚期凋亡情況及其凋亡抑制率；PI和Hoechst33342雙染色法流式檢測對人肝癌細胞株 BEL-7404各周期的影響；細胞熒光免疫染色法和免疫印記法檢測Bax和Bcl-2蛋白表達變化。
　　結果：余甘子葉抗癌化學成分不同程度的抑制人肝癌細胞株BEL-74

3、04的增殖，并呈時間和濃度依賴性。三種不同顯微鏡均可觀察到余甘子葉抗癌化學成分作用人肝癌細胞株 BEL-7404后發(fā)生的形態(tài)學改變，并出現(xiàn)典型的凋亡特征。AnnexinV/PI雙標記法檢測顯示人肝癌細胞株BEL-7404早期凋亡細胞數(shù)隨作用時間的延長而增加。Tunel法檢測晚期凋亡情況，其凋亡率亦隨作用時間的延長而增大。PI和Hoechst33342雙染色法分析結果顯示，G0/G1和G2/M期細胞數(shù)增多，S期減少，呈現(xiàn)細胞阻滯現(xiàn)象，并伴

4、有大量的細胞凋亡。熒光免疫染色顯示，藥物作用人肝癌細胞株BEL-740472h后Bax蛋白表達升高，Bcl-2蛋白表達則降低。免疫印跡法進一步驗證了熒光免疫染色的結果。
　　結論：余甘子葉抗癌化學成分能抑制人肝癌細胞株BEL-7404的增殖并誘導其產(chǎn)生凋亡，阻滯G0/G1，G2/M期細胞，并通過上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2蛋白表達，導致線立體膜電位的下降，進而激活Caspase，最終導致細胞死亡，可能是其誘導人肝癌細胞株 BEL-7