GC-MSCs和胃癌組織共差異miRNAs檢測的臨床意義及功能研究.pdf

1、目的：篩選胃癌間質干樣細胞(gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cells,GC-MSCs)和胃癌組織中差異表達的miRNAs,即GG-miRNAs。探討GG-miRNAs在胃癌組織中表達的臨床意義及其臨床病理診斷應用的價值。明確GC-MSCs對胃癌細胞的調控功能,初步探討GG-miRNAs介導GC-MSCs對胃癌細胞的作用。
　　 方法：采用組織塊

2、貼壁法從配對的胃癌與相應的癌旁組織中分離培養(yǎng)GC-MSCs和癌旁間質干細胞(gastric cancer adjacent non-cancerous tissue-derived MSCs,GCN-MSCs)。采用Exiqon miRCURYTM LNA microRNA芯片篩選GC-MSCs與GCN-MSCs、匹配的癌組織與癌旁組織差異表達的miRNA,通過芯片檢測結果分析及定量RT-PCR驗證確定GG-miRNAs。定量RT-PC

3、R檢測52例胃癌及相應癌旁組織中GG-miRNAs的表達水平,結合臨床病理資料分析GG-miRNAs與臨床病理特征的相關性。體外通過軟瓊脂克隆形成及Transwell遷移實驗檢測GC-MSCs對胃癌細胞HGC-27生長和轉移的作用。定量RT-PCR檢測作用后HGC-27中GG-miRNAs變化。體內共注射GC-MSCs和HGC-27,建立BALB/c裸鼠皮下致瘤模型,通過測定瘤體大小和繪制瘤體生長曲線分析GC-MSCs對胃癌細胞生長的作

4、用。定量RT-PCR檢測瘤組織中GG-miRNAs的表達變化。采用miRNA inhibitor轉染GC-MSCs和HGC-27,抑制相應細胞內GG-miRNAs的表達。采用軟瓊脂克隆形成及Transwell遷移實驗檢測轉染后GC-MSCs對HGC-27細胞生長及遷移的作用。定量RT-PCR檢測GC-MSC上清(GC-MSC conditioned medium,GC-MSC-CM)作用轉染后HGC-27中GG-miRNAs的表達。

5、r>　　 結果：分離純化獲得7對GC-MSCs和GCN-MSCs。芯片篩選檢測發(fā)現(xiàn)胃癌組織上調miRNAs有253個,下調miRNAs有243個,GC-MSC上調miRNAs有177個,下調miRNAs有160個。兩組差異miRNAs表達譜有部分重疊,重疊上調的miRNAs有25個,下調的有11個。選取其中共上調顯著的5個miRNAs(miR-125b、miR-199a-5p、miR-214、miR-221和miR-222)進行驗證,

6、發(fā)現(xiàn)miR-214,miR-221和miR-222均在GC-MSC和胃癌組織中高表達,被命名為GG-miRNAs。GG-miRNAs在胃癌組織中的表達均高于相應癌旁組織。miR-214的表達與胃癌的侵襲深度,漿膜侵襲及分級相關。miR-221與胃癌的淋巴結轉移和分級相關。miR-222與胃癌的侵襲深度,淋巴結轉移及分級相關。體外GC-MSCs促進胃癌細胞HGC-27的克隆形成和遷移,體內GC-MSCHGC-27共注射組瘤體體積最大且生長

7、速度最快。GC-MSC作用后胃癌細胞和瘤體組織中miR-221的表達上調顯著。靶向抑制GC-MSCs中miR-221的表達可以抑制對HGC-27的克隆形成和遷移的促進作用。GC-MSC-CM作用低表達miR-221HOC-27后可以增加其miR-221的表達。
　　 結論：GC-MSCs和胃癌組織存在著共差異表達的GG-miRNAs,GG-miRNAs在胃癌組織中高表達與臨床病理特征密切相關,可能成為新的胃癌臨床病理診斷分子標志