C-反應(yīng)蛋白與冠心病的相關(guān)研究.pdf

1、目的:(1)探討白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)第5外顯子Taq I基因多態(tài)性與冠心病(coronary heart disease,CHD)及C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)含量的關(guān)系.(2)構(gòu)建CRP的表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中表達(dá),純化獲得保持抗原性的CRP.方法:(1)采用PCR限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分別對78例冠心病病人及130例正常人的IL-1β基因Taq I多態(tài)性進(jìn)行檢測,同時

2、分析不同基因型之間的血清CRP含量的差異.(2)應(yīng)用PCR方法,從人肝細(xì)胞cDNA文庫中擴增人CRP cDNA基因片段,與表達(dá)質(zhì)粒載體pCRT7/NT TOPO重組,獲得表達(dá)質(zhì)粒CRP-pCRT7/NT,用氨芐青霉素平板篩選轉(zhuǎn)化子,雙酶切及DNA測序鑒定CRP基因表達(dá)質(zhì)粒pCRT7/NTTOPO載體的整合狀態(tài),用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析,并利用組氨酸親和層析柱純化.結(jié)果:(1)體檢健康者和CHD患者等位基因C的頻

3、率分別為:0.942、0.965;等位基因T的頻率分別0.058、0.035;對照組和冠心病組之間的基因型頻率和等位基因頻率差異均無顯著性(P>0.05);但血清CRP含量在正常對照組不同基因型之間的差異有顯著性(P<0.05).(2)成功地構(gòu)建了在大腸桿菌表達(dá)CRP的質(zhì)粒,并在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)出含6個組氨酸尾的CRP融合蛋白,在上SDS-PAGE表現(xiàn)出一條約30kD的陽性條帶,經(jīng)組氨酸親和層析柱純化后,獲得CRP的蛋白純品.結(jié)論