人雙?？刹《?HPeVs)的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的： 建立HPeV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，在住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中開展HPeV的檢測(cè)工作，初步掌握HPeV在蘭州地區(qū)住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中的流行特征；探討不同HPeV基因型與急性胃腸炎之間的關(guān)系，為進(jìn)一步揭示和闡明嬰幼兒重癥腹瀉的病因構(gòu)成及HPeV的病原學(xué)特點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。 方法： 研究對(duì)象選自2006年7月至2007年6月間，蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科因重癥腹瀉而住院的286名5歲以下兒童作為病例組；以及蘭州大學(xué)第一

2、醫(yī)院兒童體檢中心同期進(jìn)行例行體檢的98名無臨床癥狀的5歲以下兒童作為對(duì)照組，進(jìn)行病例對(duì)照研究。蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科負(fù)責(zé)收集每位研究對(duì)象的糞便標(biāo)本并填寫相關(guān)標(biāo)本采集表后低溫運(yùn)送至中國CDC病毒所。糞便標(biāo)本經(jīng)提取核酸后通過Real-timeRT-PCR檢測(cè)HPeV。隨機(jī)選取一例HPeV陽性標(biāo)本的Real-time RF-PCR產(chǎn)物經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成RNA標(biāo)準(zhǔn)品，用以對(duì)HPeV核酸濃度進(jìn)行定量。使用基于VP3/VP1基因連接區(qū)的兩對(duì)引物進(jìn)行巢式RT

3、-PCR擴(kuò)增，通過對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分型。使用MEGA3.1序列分析軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析和繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹；采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)研究結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 在本研究中，共檢出HPeV陽性標(biāo)本99例，其中病例組檢出84例，檢出率為29.4％(84/286)；對(duì)照組檢出15例，檢出率為15.3％(15/98)。在病例組84例HPeV陽性標(biāo)本中，HPeV1共發(fā)現(xiàn)43例，占51.2％，其余分別

4、為HPeV3，25例(29.8％)，HPeV4，4例(4.8％)，HPeV6，2例(2.4％)，HPeV8，1例(1.2％)，未分型標(biāo)本，9例(10.7％)；在對(duì)照組15例HPeV陽性標(biāo)本中，HPeV1共發(fā)現(xiàn)8例，占53.3％，其余分別為HPeV3，3例(20.0％)，HPeV4，3例(20.0％)，HPeV5，1例(6.7％)。HPeV2和HPeV7均未檢測(cè)到。HPeV1感染好發(fā)于秋冬季節(jié)，HPeV3感染好發(fā)于秋季；與HPeV1和HP

5、eV3感染患兒年齡相比，HPeV4感染患兒年齡較小。病例組中71.4％(60/84)的HPeV感染患兒為混合感染，對(duì)照組中HPeV感染患兒混合感染率為13.3％(2/15)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，輪狀病毒和人杯狀病毒為最常見的混合感染病毒。病毒載量最高的兩份HPeV陽性標(biāo)本均為對(duì)照組兒童，病例組和對(duì)照組間HPeV1、3、4基因型病毒載量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。VP3/VP1基因進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，有一份毒株(N0．4

6、9330)無法被分型，它與相臨參考株的氨基酸同源性分別為89.41％和67.44％。對(duì)不同組間臨床癥狀比較發(fā)現(xiàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，HPeV1和HPeV3感染并不能加重腹瀉患兒的臨床癥狀。 結(jié)論： HPeV在蘭州地區(qū)腹瀉住院患兒和無癥狀兒童糞便標(biāo)本中的檢出率均較高，且有多種基因型在流行。研究結(jié)果提示，HPeV1和HPeV3可能并不是5歲以下兒童胃腸炎的致病原。因此，推測(cè)HPeV1和HPeV3可能是胃腸道(g