金針菇與巨大口蘑原生質(zhì)體融合育種研究.pdf

1、金針菇[Flammulina velutiper(Fr.) Sing]是著名的食用菌工廠化生產(chǎn)品種，其生長周期短，出菇產(chǎn)量高，且營養(yǎng)豐富，具有抗癌、防心腦血管疾病等功效。然而在工廠化栽培金針菇過程中由于低溫控制所需能耗較大，企業(yè)運營成本增加。
　　巨大口蘑(Tricholoma giganteum)是高溫型食用菌品種，食藥用價值高，貯藏性好且抗逆性強。但是由于其菌絲生長速度慢，出菇周期長，還無法全面普及市場；原生質(zhì)體融合技術(shù)在食用

2、菌領(lǐng)域上是一項重要的育種技術(shù)，相比于傳統(tǒng)的雜交技術(shù)，它具有省時省力、目的性強等特點。本研究意在利用原生質(zhì)體融合技術(shù)培育出能在中高溫環(huán)境下生長出菇的金針菇新菌株和生長周期短的巨大口蘑新菌株。
　　本研究對來源不同的金針菇和巨大口蘑菌株進(jìn)行了親本菌株的篩選，優(yōu)勢菌株原生質(zhì)體經(jīng)雙親滅活后利用PEG進(jìn)行融合，最后獲得與親本有遺傳差異性的菌株4株，采用分子生物學(xué)ISSR分析方法對其進(jìn)行了鑒定，同時，還研究了它們的生物學(xué)特性。主要研究結(jié)果如下

3、：
　　1、親本菌株的篩選。本研究以菌絲生長速度、原生質(zhì)體產(chǎn)量和原生質(zhì)體的單核化程度為指標(biāo)，最終篩選確定JD03以及KD04作為原生質(zhì)體融合的親本菌株。
　　2、金針菇與巨大口蘑原生質(zhì)體融合工藝設(shè)計與優(yōu)化。應(yīng)用均勻設(shè)計法對金針菇和巨大口蘑原生質(zhì)體融合工藝進(jìn)行設(shè)計與優(yōu)化，結(jié)果表明：PEG的濃度為25.91％，融合時間24.52 min，融合溫度為25.6℃，Tris添加量為0.016 mol/L，CaCl2添加量為0.014

4、mol/L，pH值為8.34時，金針菇與巨大口蘑原生質(zhì)體的融合率達(dá)到最大，為1.68×10-3。
　　3、應(yīng)用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對融合菌株進(jìn)行了篩選和鑒定。通過形態(tài)學(xué)特征的比較，本實驗篩選獲得融合菌株4株，其生長速度快，與親本形成明顯的拮抗線，菌絲鎖狀聯(lián)合結(jié)構(gòu)清晰可見；采用ISSR技術(shù)對其中R13、R14、R15三株融合菌株進(jìn)行鑒定，并進(jìn)行遺傳相關(guān)系數(shù)和聚類分析。R13、R14、R15與巨大口蘑之間的遺傳相似系數(shù)均為0.49，

5、與金針菇的遺傳相似系數(shù)均為0.45。初步說明R13、R14、R15均為新菌株，但與雙親親緣關(guān)系不明顯。
　　4、對融合菌株R13、R14、R15母種培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，R13最適母種培養(yǎng)基為：葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.1%、VB120 mg/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.55%、硫酸鎂0.17%、磷酸二氫鉀0.1%。采用該培養(yǎng)基，在pH為9.5時，融合菌株R13的菌絲生長速度最快；R14最適母種培養(yǎng)基為：葡萄糖1%、蛋白胨0.

6、6%、酵母膏0.1%、VB12.1 mg/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.55%、硫酸鎂0.12%、磷酸二氫鉀0.55%。采用該培養(yǎng)基，在pH為7.6時，融合菌株R14的菌絲生長速度最快；R15最適母種培養(yǎng)基為：葡萄糖2.8%、蛋白胨0.1%、酵母膏0.1%、VB13.3 mg/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.55%、硫酸鎂0.14%、磷酸二氫鉀0.55%。采用該培養(yǎng)基，在pH為10.5時，融合菌株R15的菌絲生長速度最快。
　　5、對融合菌株R13、R14