毛白楊癭木形成的解剖學(xué)特征初步研究與毛白楊體內(nèi)農(nóng)桿菌的檢測.pdf

1、癭木因其多變的色彩，美麗大方的紋理被廣泛的應(yīng)用于珍貴家具的貼面和各種各樣的工藝品的制作上。但由于癭木自身形成的特殊過程，使癭木生產(chǎn)受到限制。本課題研究的目的是利用微生物的致病性進行癭木的培育，以獲得更多的癭木原材料。本文以毛白楊雄株-D組織培養(yǎng)苗為實驗材料，利用根癌農(nóng)桿菌侵染植物的特性，對毛白楊雄株-D進行了野生根癌農(nóng)桿菌致瘤基因的轉(zhuǎn)化，建立了轉(zhuǎn)致瘤基因的毛白楊的再生體系；對被致瘤根癌農(nóng)桿菌侵染的毛白楊雄株-D的莖及發(fā)生的癭瘤，進行細胞

2、組織學(xué)觀察；最后對致瘤根癌農(nóng)桿菌接種毛白楊雄株-D后，其在植物體內(nèi)的分布進行了檢測。 本試驗主要得出以下結(jié)論：1.毛白楊雄株-D被根癌農(nóng)桿菌侵染后，取第5d和第30d腫瘤及其附近的莖組織，進行解剖結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)：當(dāng)致瘤農(nóng)桿菌侵染毛白楊莖組織時，形成層細胞和木質(zhì)部薄壁細胞對農(nóng)桿菌最為敏感，接種位置的形成層向外分裂的細胞數(shù)量明顯增多，同時木質(zhì)部的薄壁細胞以及髓心部位也產(chǎn)生大量細胞，并逐漸分化成木質(zhì)部細胞，這說明該部位可能是腫瘤細胞形成

3、過程中，細胞發(fā)生分裂的起始部位。由于冠癭細胞的大量增生，對莖的組織結(jié)構(gòu)也產(chǎn)生了一定的影響，寄主的莖橫切面呈不規(guī)則圓形，增生部位的髓射線明顯增多，而正常植株只有少數(shù)幾列或者不明顯。維管束中，導(dǎo)管數(shù)量減少，接種部位下寄主維管束增生后，導(dǎo)管口徑增大，而接種部位以上寄主維管束中導(dǎo)管口徑變小。在瘤體組織中可明顯觀察到維管束的分化，通常木質(zhì)部成分被韌皮部成分包被，木質(zhì)部元素呈樹狀分支或渦旋狀分布，并和寄主維管束相連接。 2.用根癌農(nóng)桿菌(A

4、grobacteriumtumfacience)三個菌株感染轉(zhuǎn)雙抗蟲基因毛白楊雄株-D無菌苗，誘導(dǎo)冠癭瘤，結(jié)果表明1-1-2菌株的的毒性(致瘤能力)最強，毛白楊雄株-D冠癭組織經(jīng)除菌后能在無激素的培養(yǎng)基上良好生長，MS培養(yǎng)基附加TDZ0.1mg/L+IBA1.0mg/L誘導(dǎo)毛白楊再生植株的頻率最高。對誘導(dǎo)分化的再生植株進行高壓紙電泳和PCR檢測，有三個系號檢測到冠癭堿，同時也檢測到外源基因(iaaH,tml,chvD)的特異擴增條帶，這

5、表明Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化毛白楊雄株-D成功。 3.致瘤根癌農(nóng)桿菌1-1-2針刺接種組培苗后，在一個月以后進一步分離植物各個器官中的細菌，并采用PCR技術(shù)檢測目的菌在植物中的分布，在組培苗植株的根，莖，葉，瘤中均分離并檢測到了目的菌株的存在，推測毛白楊組培苗莖部被接種以后，根癌農(nóng)桿菌可能在毛白楊樹體內(nèi)隨樹液流動而分布到其它各個器官。根癌農(nóng)桿菌人工接種大田毛白楊雄株后，對樹體各個器官進行細菌的分離，結(jié)果只在冠癭瘤中分離并檢測到目的菌，在植物