過(guò)量和誘導(dǎo)表達(dá)APX基因?qū)γ讞羁鼓婺芰Φ挠绊?pdf

1、逆境會(huì)使植物細(xì)胞積累大量的活性氧，如果這些活性氧得不到有效清除就會(huì)對(duì)植物造成傷害。植物體內(nèi)活性氧清除系統(tǒng)主要包括酶促清除系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)兩大類?？箟难徇^(guò)氧化物酶是一種亞鐵血紅素蛋白，它以抗壞血酸為電子供體將H2O2分解為水，在植物體內(nèi)的活性氧清除中發(fā)揮著重要作用。其同工酶定位于細(xì)胞的幾個(gè)不同部位，其中葉綠體抗壞血酸過(guò)氧化物酶已被認(rèn)為是葉綠體中清除H2O2的關(guān)鍵酶。 花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子（CaMV35S）是一種組成型啟動(dòng)子，

2、是目前基因工程中最常用的啟動(dòng)子，它在生物體的不同組織器官、不同發(fā)育階段均可啟動(dòng)基因表達(dá)；而擬南芥rd29啟動(dòng)子是一種脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，僅在高鹽、低溫、干旱或ABA誘導(dǎo)時(shí)才會(huì)啟動(dòng)基因表達(dá)。 本研究利用pBI121-APX、pBI101-RD29-APX重組質(zhì)粒，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉圓盤轉(zhuǎn)化法將目的基因片段導(dǎo)入741毛白楊基因組中獲得轉(zhuǎn)基因毛白楊，分析組成型表達(dá)和誘導(dǎo)表達(dá)APX基因?qū)γ讞羁鼓婺芰Φ挠绊憽１菊撐闹饕Y(jié)果如下：

3、1)PCR及實(shí)時(shí)定量PCR:PCR結(jié)果顯示，以轉(zhuǎn)基因毛白楊葉片基因組DNA為模板，用NPTII引物能擴(kuò)增出特異DNA片段，而野生型植株未見(jiàn)特異條帶，說(shuō)明pBI121-APX、pBI101-RD29-APX基因片段可能已導(dǎo)入毛白楊基因組中。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，正常條件下轉(zhuǎn)35S-APX植株APX水平高于對(duì)照，而轉(zhuǎn)RD29-APX植株植株與對(duì)照沒(méi)有明顯差別。說(shuō)明35S-APX基因片段可能確已在植物體內(nèi)得到表達(dá)。 2)MV處理：M

4、V處理結(jié)果顯示，0.02mM的MV處理，28℃、強(qiáng)光下培養(yǎng)4天，對(duì)照及轉(zhuǎn)35S-APX植株、轉(zhuǎn)RD29-APX植株的實(shí)驗(yàn)葉片都遭到了傷害，且對(duì)照植株葉片受傷害程度最大。本文進(jìn)而對(duì)其葉片的總?cè)~綠素含量做了分析，數(shù)據(jù)顯示轉(zhuǎn)基因植株比對(duì)照植株葉片總?cè)~綠素含量下降的稍少。 3)鹽處理：50mMNaCl處理（5周）毛白楊試管苗幾乎完全抑制了對(duì)照植株生根，而轉(zhuǎn)35S-APX植株、轉(zhuǎn)RD29-APX植株仍然可以生根，同時(shí)發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)表達(dá)APX的轉(zhuǎn)