反義表達apx基因?qū)χ参锟鼓婺芰Φ挠绊?pdf

1、植物在遭受外界脅迫時,體內(nèi)會積累大量的活性氧,高水平的活性氧若得不到及時的清除,則會對植物造成傷害.抗壞血酸過氧化物酶(APX)是植物體內(nèi)重要的活性氧清除酶類,該酶主要依靠 AsA-GSH循環(huán)清除植物體內(nèi)過量的H2O2,從而增強植物對外界脅迫的抵抗能力.本文通過設(shè)計741毛白楊apx的cDNA保守區(qū)反義序列,構(gòu)建反義表達載體,得到含有目的基因片段的轉(zhuǎn)基因煙草,探究反義表達apx-I和apx-IX對煙草抗逆(干旱、高鹽及氧化脅迫)能力的影

2、響.主要研究結(jié)果如下:
　　1、構(gòu)建了8種 PBI121-apx反義表達載體,并將表達載體成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404中,分別利用帶有目的基因片段的農(nóng)桿菌浸染煙草葉片,以20mg/L的Kan作為選擇壓篩選不定芽,獲得具有Kan抗性的再生植株.
　　2、為了進一步檢測再生煙草植株,對得到的抗性苗進行PCR檢測及GUS組織化學染色,證明已成功獲得8種反義表達apx基因煙草.
　　3、在干旱脅迫下,轉(zhuǎn)基因植株較野生型植株更早

3、的出現(xiàn)葉片萎蔫及枯黃,轉(zhuǎn)基因植株含水量較野生型下降更為顯著,反義表達植株體內(nèi)APX活性較低，H2O2含量明顯升高,膜透性亦明顯增加.測定結(jié)果顯示,反義表達apx-I和apx-IX增強了煙草對干旱脅迫的敏感性。
　　4、apx-I和apx-IX的反義表達限制了鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)基因植株體內(nèi)APX的活性,經(jīng)2周鹽處理后,轉(zhuǎn)反義基因植株體內(nèi)H2O2含量顯著或極顯著高于野生型,同時轉(zhuǎn)基因植株的相對電導率、MDA含量明顯升高,而葉綠素含量則明顯