納米級對氨基苯胂酸微粒對斷奶仔豬的抗菌促生長效果及其機理研究.pdf

1、本課題以納米級對氨基苯胂酸微粒(p-ASAP)為抗菌材料，用對氨基苯胂酸(p-ASA)為對照，在體外細菌培養(yǎng)條件下探討其抗菌活力及其機理。在此基礎上，以30日齡“杜大長”三元雜交斷奶仔豬為試驗動物，研究了p-ASAP對斷奶仔豬生長性能、腹瀉率、腸道結構功能、腸道微生物變化和組織器官砷殘留的影響。 體外抗菌試驗以大腸桿菌Escherichia coli；豬霍亂沙門氏菌Salmonellachloleraesuis；金黃色葡萄球菌S

2、taphylococcus aureus，嗜酸乳酸桿菌Lactobacillusacidophilus和兩歧雙歧桿菌Bffidobacterium bifidum為試驗菌種，抗菌效果測定方法采用美國國家臨床實驗室標準委員會推薦的在體外對需氧型細菌及厭氧型細菌進行藥敏試驗的方法。眼觀無細菌生長所含最低藥物濃度即為最小抑菌濃度MIC：將所有清晰、無細菌生長的試管培養(yǎng)液接種于MH瓊脂平板培養(yǎng)，以菌落數(shù)不超過5個的最低藥物濃度為該藥物的MBC；

3、采用微生物黏著碳氫化合物法測定p-ASAP對大腸桿菌表面疏水性的影響；并在原子力顯微鏡下觀察p-ASAP對豬霍亂沙門氏菌Salmonella chloleraesuis結構、形態(tài)方面變化的影響，探討殺菌機理。 飼養(yǎng)試驗采用單因子試驗設計，選擇216頭(體重7.0±0.40 kg)杜長大三元雜交斷奶仔豬，按飼養(yǎng)試驗要求分成6組，每組設3個重復，每個重復12頭(公母各半)，試驗豬分別飼喂基礎同糧(對照1組)、基礎同糧+90mg/kg

4、 p-ASA(美國FDA推薦劑量，對照2組)、基礎R糧+10mG/kg p-ASAP(試驗1組)、基礎日糧+30mg/kg p-ASAP(試驗2組)、基礎同糧+60mg/kg p-ASAP(試驗3組)、基礎同糧+90mg/kg p-ASAP(試驗4組)。試驗豬飼養(yǎng)于封閉、半漏縫地板式豬舍，每個重復仔豬飼養(yǎng)于一欄。飼喂方式采用自由采食，自由飲水。預試期5d，試驗期35d。飼養(yǎng)試驗結束空腹稱重后，分別從對照1、2組及試驗組中生長最佳組隨機選

5、體重相近的試驗豬8頭(公母各半)進行屠宰試驗。在自由飲水情況下禁食24小時后屠宰取樣，分析測定。 體外抗菌試驗結果表明，對氨基苯胂酸經(jīng)納米粒徑化處理成60nm大小的微粒后，顯著提高了它的抗菌活力，對大腸桿菌K<,88>、大腸桿菌、豬霍亂沙門氏菌和金黃色葡萄球菌、嗜酸乳酸桿菌和兩歧雙歧桿菌的最小抑菌濃度分別達到4、4、2、2、8、和4μg/ml；最小殺菌濃度分別達到8、16、8、8、32和32μg/ml。同時發(fā)現(xiàn)p-ASAP對豬霍

6、亂沙門氏菌和金黃色葡萄球菌有較強的抑制作用，而且對腸道有益菌一嗜酸乳酸桿菌和兩歧雙歧桿菌也具有一定的殺滅作用。通過原子力顯微鏡觀察p-ASAP處理的S. choleraesuis形態(tài)學變化發(fā)現(xiàn)，當細菌用8μg/mL p-ASAP處理30min后，細胞被P-ASAP粒子包圍，60min后細胞從圓球形變?yōu)闊o規(guī)則形狀，1.5h后變?yōu)楸馄叫螤?，同時細胞膜出現(xiàn)孔洞，隨著時間的推移，細胞開始萎縮變小，細胞膜破裂，胞內物質泄露，3h后S. chole

7、raesuis細胞分解為碎片。隨著P-ASAP濃度的增加，大腸桿菌表面疏水性顯著下降，在菌液中添加90mg/L P-ASA，大腸桿菌表面疏水性下降了38.82％(p<0.05)；添加10、30、60和90mg/L P-ASAP懸濁液，大腸桿菌表面疏水性分別下降了47.74％(p<0.05)、59.66％(p<0.05)、74.38％(p<0.01)和79.86％(p<0.01)。 飼養(yǎng)試驗結果表明，與對照1組相比，在斷奶仔豬日糧

8、中添加10、30、60、90mg/kgp-ASAP，R均采食量分別提高了12.0％07<0.05)、13.98％(p<0.05)、9.80％(p<0.05)和12.99％(p<0.05)：日增重分別提高了28.99％(p<0.05)、29.23％07(p<0.05)、21.13％(p<0.05)和23.58％(p<0.05)；飼料轉化率分別提高16.66％(p<0.01)、15.15％(p<0.05)、12.12％(9<0.05)和 1

9、0.6％(p<0.05)；腹瀉率分別下降52.23％(p<0.01)、65.39％(p<0.01)、58.81％(p<0.01)和64.21％(p<0.01)：試驗組之間，30、60、90mg/kg比10mg/kgp-ASAP組腹瀉率分別下降22.76％(p<0.05)、13.17％(p<0.05)和25.06％(p<0.05)；其它指標差異不顯著。與90mg/kg P-ASA(對照2組)相比，在斷奶仔豬月糧中添加10、30、60、90

10、mg/kgP-ASAP，腹瀉率分別下降了38.68％(p<0.05)、55.57％(p<0.05)、47.13％(p<0.05)和54.05％(p<0.05)；其它指標差異不顯著。 消化試驗結果表明，與對照1組相比，在斷奶仔豬日糧中添加10、30、60和90mg/kgp-ASAP，日糧中干物質消化率分別提高13.03％(p<0.05)、14.55％(p<0.05)、11.47％(p<0.05)和12.74％(p<0.05)；粗蛋

11、白消化率分別提高16.06％(p<0.05)、15.04％(p<0.05)、14.19％(p<0.05)和 14.08％(p<0.05)；粗脂肪消化率分別提高13.55％(p<0.05)、12.30％(p<0.05)、16.35％(p<0.05),114.64％(p<0.05)：粗纖維消化率分別提高18.87％(p<0.05)、20.39％(p<0.05)、24.70％(p<0.05)和19.33％(p<0.05)；與90mg/kg對氨

12、基苯胂酸相比，各指標差異不顯著；試驗組之間各指標差異均不顯著。 腸道微生物培養(yǎng)分析顯示，與對照1組相比，在斷奶仔豬日糧中添加10mg/kgp-ASAP，空腸內容物中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降21.23％(p<0.05)、21.18％(p<0.05)、41.63％(p<0.01)和41.01％(p<0.01)；回腸中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降17.91％(p<0.05)、20.11％

13、(p<0.05)、38.54％(p<0.01)和33.12％(p<0.01):結腸中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降13.75％(p<0.05)、14.82％(p<0.05)、33.85％(p<0.01)和30.18％(p<0.01)；與對照2組相比，空腸中大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降16.96％(p<0.05)和 14.69％(p<0.05)；回腸中大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降19.96％(p<0.05)和12.

14、39％(p<0.05)；結腸中大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別下降14.81％(p<0.05)和 7.59％(p<0.05)。試驗結果表明P-ASAP對斷奶仔豬腸道有害菌有較強的抑制和殺滅作用；同時對有益菌也有一定的抑制和殺滅作用。 小腸形態(tài)結構觀察結果表明，與對照1組相比，在斷奶仔豬同糧中添加10mg/kgP-ASAP，空腸、回腸組織絨毛長度分別高41.06％(p<0.01)和18.02％(p<0.05)，隱窩深度淺22.72％(p

15、<0.05)和113.82％(p<0.05)；絨毛高度和隱窩深度比值提高82.60％(p<0.01)和37.14％(p<0.01)；十二指腸絨毛長度和絨毛高度和隱窩深度比值有提高趨勢，隱窩深度有下降趨勢；與對照2組相比，空腸組織絨毛高度高20.0％(p<0.05)，絨毛高度和隱窩深度比值提高29.89％(p<0.05)；隱窩深度無顯著差異。實驗結果表明，在同糧中添加P-ASAP可以減輕仔豬因斷奶所致的小腸絨毛萎縮和隱窩加深的程度，有利于

16、營養(yǎng)物質的消化吸收。 消化道酶活分析表明，與對照1組相比，日糧中添加添加10mg/kg p-ASAP，斷奶仔豬十二指腸內容物中乳糖酶、淀粉酶、脂肪酶、總蛋白水解酶活性分別提高27.15％(p<0.05)、49.35％(p<0.5)、38.94％(p<0.5)和38.39％(p<0.05)；空腸粘膜二糖酶麥芽糖酶、蔗糖酶、乳糖酶活性分別提高55.74％(p<0.01)、47.16％(p<0.01)和63.88％(p<0.01)；與

17、對照2組相比，麥芽糖酶、蔗糖酶活性分別提高17.48％(p<0.05)、29.69％(p<0.05)；乳糖酶活性有提高趨勢，但未達到顯著水平。 血清指標分析結果表明，與對照1組相比，在日糧中添加10mg/kgp-ASAP，斷奶仔豬血清中TNF-α、IL-6和尿素氮水平下水平分別下降78.29％(p<0.01)、61.42％(p<0.01)和19.26％(p<0.05)，血清磷水平提高39.79％(p<0.01)；其它指標差異不顯

18、著。與對照2組相比所有指標差異不顯著。 腸道核因子測定結果表明，與對照1組相比，在斷奶仔豬同糧中添加10mg/kgP-ASAP，空腸粘膜中核因子NF-κB活性下降68.53％(p<0.01)：與對照2組相比，下降33.33％(p<0.05)。 綜上所述，對氨基苯胂酸經(jīng)納米粒徑化處理后，顯著提高了抗菌活力：在斷奶仔豬日糧中添加低劑量(10mg/kg)p-ASAP微粒達到了高劑量(90mg/kg)p-ASA的抗菌促生長效果，并