腫瘤壞死因子-α及白細(xì)胞介素-1β對肝癌細(xì)胞乙酰肝素酶表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌(HCC)是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，且近年來其發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢。由于其具有侵襲性強(qiáng)，易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性，目前包括手術(shù)、放療、化療等各種治療方法的效果均不夠理想。因此，明確其侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生機(jī)制和探索新的、有效的治療方法已成為當(dāng)前腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。乙酰肝素酶(hpa)是目前發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中唯一能切割細(xì)胞外基質(zhì)中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖側(cè)鏈的內(nèi)源性糖苷酶，在腫瘤組織中廣泛表達(dá)，通過降解細(xì)胞外基質(zhì)

2、和血管基底膜、釋放和活化線形硫酸乙酰肝素側(cè)鏈結(jié)合型的生長因子(如 bFGF、VEGF等)誘導(dǎo)血管生成，對促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移起重要作用。TNF-α、IL-1β是由多種免疫細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的較為重要且具有代表性的細(xì)胞因子，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多種生物學(xué)功能。有研究報(bào)道炎癥發(fā)生時(shí)，機(jī)體分泌的TNF-α、IL-1β能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞 Hpa 表達(dá)上調(diào)，從而有利于炎細(xì)胞的擴(kuò)散。此效應(yīng)在腫瘤發(fā)生時(shí)是否同樣顯現(xiàn)則未見報(bào)道。本研究通過應(yīng)用TNF-α、

3、IL-1β分別處理SMMC-7721肝癌細(xì)胞，觀察HpamRNA和蛋白表達(dá)的變化，明確TNF-α及IL-1β與Hpa表達(dá)之間的關(guān)系，為進(jìn)一步探討肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制以及以Hpa為新靶點(diǎn)的治療方法提供試驗(yàn)依據(jù)。 方法：肝癌細(xì)胞系 SMMC-7721 分對照組和試驗(yàn)組。對照組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，試驗(yàn)組細(xì)胞分別施加TNF-α、IL-1β干預(yù)，設(shè)濃度梯度和時(shí)間梯度。采用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)，測定細(xì)胞Hpa mRNA表達(dá)

4、的變化，以β-actin作為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn)，通過凝膠掃描儀對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA電泳條帶的光密度值分析，將 Hpa 與β-actin比值作為 HpamRNA表達(dá)水平的參數(shù)，對Hpa產(chǎn)物相對定量；以 Westernblot方法檢測SMMC-7721細(xì)胞胞漿 Hpa 蛋白表達(dá)的變化，同樣以β-actin作為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn)，對 Hpa 蛋白進(jìn)行相對定量分析。所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗(yàn)

5、。P<0.05為有顯著差異。 結(jié)果： 1.不同濃度的TNF-α、IL-1β作用不同時(shí)間后，SMMC-7721細(xì)胞Hpa mRNA表達(dá)較對照組逐漸增高，且在TNf-α濃度為10<'4>U/L-10<'6>U/L、IL-1β濃度為0.5μg/L-5.0μg/L范圍內(nèi)存在濃度依賴性，不存在時(shí)間依賴性。 2.不同濃度的 TNF-α、IL-1β作用不同時(shí)間對SMMC-7721細(xì)胞胞漿Hpa蛋白表達(dá)亦有促進(jìn)作用，其隨藥物