納米粒子介導的轉基因技術在心梗后促血管重建的應用研究.pdf

1、本文采用由非病毒載體介導的轉基因方法，即用包載pVEGF<,165>的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)納米粒子進行心梗后治療性血管再生的基因治療。首先在體外對原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞進行了轉染實驗，通過對轉染細胞熒光顯微鏡下的觀察及VEGFl6~nRNA表達的特異性檢測，驗證了pVEGF-PLGA納米粒子介導心肌組織轉基因的可行性，并對納米粒子的緩釋效果初步的評估；其次制備大鼠心梗模型，以此為心肌缺血的研究平臺，通過心肌內直接注射的方式進行

2、pVEGF-PLGA納米粒子介導基因治療的體內研究，分別對pVEGF-PLGA納米粒子治療組及單純pVEGF質粒、空載PLGA納米粒子對照組的治療效果進行了綜合評估：(1)通過RT-PCR檢測了VEGF<,165> mRNA在缺血心肌組織的表達，證實納米粒子介導轉基因的可行性及基因表達的持續(xù)性，并結合免疫組化分析了VEGF<,165>表達的組織分布及表達細胞類型；(2)通過組織特異性PCNA免疫組化分析評估pVEGF-PLGA納米粒子基

3、因治療促血管生成及維持新生血管存留、促進其成熟的作用；(3)通過天狼猩紅染色、分析軟件定量分析，對比評估了各組心梗區(qū)及心梗交界區(qū)纖維化的狀況；(4)通過電鏡觀察探討納米轉基因的可能機制；(5)對pVEGF<,165>-PLGA納米粒子局部心肌注射是否能引起全身副反應進行檢測，評估pVEGF-PLGA納米粒子轉基因的安全性。綜合上述結果證實納米轉基因是一種安全有效的轉基因方式，pVEGF-PLGA納米粒子介導的基因治療能有效促進心梗后缺血