利用組織芯片技術(shù)研究p73基因編碼蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、前言：近年來發(fā)展的組織微陣列/組織芯片技術(shù)是將多個(gè)細(xì)小組織片整齊排列于同一載體而成的縮微組織切片，具有體積小、信息含量高的特點(diǎn)。適于免疫組織化學(xué)和DNA、BNA原位雜交，并能大大提高實(shí)驗(yàn)效率，而且可以根據(jù)需要靈活設(shè)計(jì)，所得結(jié)果均一可靠、可比性強(qiáng)。近年來多項(xiàng)研究表明組織微陣列/組織芯片技術(shù)在腫瘤病理研究和臨床病理診斷中有廣泛而特殊的用途。 胃癌是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，但其發(fā)病機(jī)制目前仍不十分清楚。有研究顯示P73基

2、因異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性。p73基因和p53基因相似的結(jié)構(gòu)、特殊的定位及相似的功能蛋白而被認(rèn)為是是侯選的抑癌基因。但近年來許多研究發(fā)現(xiàn)P73基因的高表達(dá)改變與經(jīng)典的抑癌基因失活致癌理論相矛盾，因此有研究者對(duì)P73基因是否為抑癌基因提出疑問。P73是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的基因，目前它的功能及具體誘導(dǎo)、活化調(diào)控機(jī)制，特別是在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用及與p53基因的關(guān)系尚不十分清楚。本文采用免疫組織化學(xué)方法觀察胃癌及其癌前病變組織中p73

3、、p53基因編碼蛋白的表達(dá)與胃黏膜癌變、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討p73、p53基因異常表達(dá)在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制及相互關(guān)系。 目的：構(gòu)建胃癌及其癌前病變組織芯片，采用免疫組化方法觀察研究p73和mp53基因編碼蛋白在胃癌中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義，探討其在胃癌發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子病理學(xué)機(jī)制，期望能進(jìn)一步闡釋P73基因編碼蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用和可能的機(jī)制，同時(shí)將組織芯片這種高通量、平行性好的新技術(shù)應(yīng)用于腫

4、瘤病理學(xué)的研究，顯著提高研究工作的效率。 材料與方法臨床資料及組織芯片制作：收集2003-2004年遼寧省腫瘤醫(yī)院和中國醫(yī)大附屬一院104例胃癌及癌前病變組織蠟塊標(biāo)本，利用組織芯片制作儀(美國)穿取選擇定位的目標(biāo)組織(組織樣品直徑為1mm)排列在受體蠟塊中，構(gòu)建成兩個(gè)胃癌及其癌前病變的組織芯片蠟塊(蠟塊A共包含101個(gè)樣品：癌組織32例，遠(yuǎn)端正常組織32例，不典型增生5例，腸化生32例。蠟塊B共包含124個(gè)樣品：癌組織72例，遠(yuǎn)

5、端正常組織47例，腸化生4例，不典型增生1例)。對(duì)2個(gè)組織芯片蠟塊行4um連續(xù)切片，其中1張行常規(guī)HE染色，其它保存?zhèn)溆谩?免疫組化染色及結(jié)果判定方法：采用SABC免疫組化方法檢測胃癌組織芯片中p73和mp53蛋白的表達(dá)。兔抗人P73多克隆抗體(工作濃度1：100)購自武漢博士德生物技術(shù)公司，鼠抗人p53單克隆抗體(即用型)及通用型SABC試劑盒購自北京中山生物技術(shù)公司。已知陽性組織片做陽性對(duì)照，以PBS替代一抗做陰性對(duì)照。免疫

6、組化染色結(jié)果判定方法：p73蛋白陽性反應(yīng)顆粒定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，p53蛋白陽性反應(yīng)顆粒定位于細(xì)胞核。每例標(biāo)本選擇2個(gè)有代表性的高倍視野，計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，取平均值。陽性細(xì)胞數(shù)＜5％為陰性(-)，5％-25％為弱陽性(+)，25-50％為中度陽性(++)，＞50％為強(qiáng)陽性(+++)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS-12統(tǒng)計(jì)學(xué)系統(tǒng)軟件處理，進(jìn)而判斷p73、p53蛋白表達(dá)與胃癌及其癌前病變病理生物學(xué)行為指標(biāo)之間的關(guān)系

7、，及p73、p53基因編碼蛋白表達(dá)的相互關(guān)系。P＜0.05視為差異具有顯著性。 結(jié)果免疫組化染色結(jié)果：胃癌及其癌前病變組織芯片在免疫組織化學(xué)染色過程中因高壓熱處理抗原修復(fù)有部分脫落，其余組織陽性信號(hào)清晰，背景清潔。最終可用病例為遠(yuǎn)癌正常胃黏膜28例、腸上皮化生25例、不典型增生5例、胃癌81例。P73蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，mp53蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核。 P73蛋白在胃癌及其癌前病變組織中的表達(dá)：P73基因

8、編碼蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率(90.1％)顯著高于遠(yuǎn)癌正常胃黏膜(17.9％)，P＜0.01；P73蛋白在腸上皮化生組織中的陽性表達(dá)率(44.0％)顯著高于遠(yuǎn)癌正常胃黏膜，不典型增生病變組織中P73蛋白陽性表達(dá)率(80.0％)顯著高于遠(yuǎn)癌正常胃黏膜，P＜0.05，但與腸上皮化生之間無顯著差異。胃癌Bormann大體分型中，Bor.Ⅲ/Ⅳ型胃癌p73蛋白陽性表達(dá)率(92.9％/100％)顯著高于Bor.Ⅱ型胃癌(57.1％)，P＜0.

9、05；伴轉(zhuǎn)移胃癌組p73蛋白陽性表達(dá)率(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組94.4％，肝轉(zhuǎn)移組100％，卵巢轉(zhuǎn)移100％)顯著高于無轉(zhuǎn)移組(76.2％)，P＜0.05。 胃癌組織中P73蛋白與mp53蛋白表達(dá)的關(guān)系：胃癌組織中P73蛋白表達(dá)與mp53蛋白表達(dá)密切相關(guān)(P＜0.01)，相關(guān)系數(shù)r=0.286。 結(jié)論：1.P73基因編碼蛋白表達(dá)與胃黏膜癌前病變及胃癌的惡性病理生物學(xué)行為密切相關(guān)。P73基因編碼蛋白雖與抑癌基因P53編碼蛋白同源，但