棉花黃萎病抗性評價關(guān)鍵技術(shù)及分子檢測方法研究.pdf

1、棉花黃萎病作為土傳性維管束病害，嚴(yán)重制約著棉花生產(chǎn)。其發(fā)病時間長，化學(xué)防治和生物防治難度大，種植抗病品種是最經(jīng)濟有效的措施。無論是抗病育種材料的篩選還是棉花品種審定，準(zhǔn)確評價品種的黃萎病抗性是技術(shù)核心。棉花黃萎病對棉株的影響是全方位、多因素的，要綜合各項指標(biāo)聯(lián)合評定。本研究以2014年農(nóng)業(yè)部主推的14個棉花品種為試驗材料，系統(tǒng)研究了黃萎病抗病鑒定關(guān)鍵技術(shù)，確定了病圃的標(biāo)準(zhǔn)接菌量，建立了與產(chǎn)量相關(guān)的分級標(biāo)準(zhǔn)等。以不同抗病性的28個棉花品種

2、為研究對象，初步探索了基于qPCR抗病性的快速檢測方法。主要結(jié)果如下：
　　1.在人工病圃內(nèi)進行小區(qū)試驗，通過設(shè)置濃度梯度，用實際病情指數(shù)衡量感病品種冀棉11在不同接菌濃度下的發(fā)病程度，來確定不同接種方法的最佳接菌量。根據(jù)發(fā)病均勻度和病情指數(shù)的可信度得知，小區(qū)接種和行溝接種的最佳接菌量分別為60 g/㎡和10 g/m。
　　2.以中植棉2號，魯棉研28，中棉所50，中棉所49和中棉所63為試驗材料，以10株為單位，分別與10

3、0株的大群體的病情指數(shù)進行分析比較。結(jié)果顯示，當(dāng)調(diào)查株數(shù)大于等于50株時，偏離率均小于5％，屬于較為可信的范疇。因此50株為最小調(diào)查株數(shù)。
　　3.通過分析耐病品種魯棉研28和中棉所63的產(chǎn)量和發(fā)病級別的關(guān)系，初步制定了新的病情分級標(biāo)準(zhǔn)，按照植株發(fā)病面積分為五級：0級（0%）、1級（1%-33%）、2級（34%-66%），3級（67%-99%）和4級（100%），兩個品種均表現(xiàn)隨著病情級別的增加產(chǎn)量逐漸降低，且不同級別的病株之間差

4、異達到顯著水平，1、2、3和4級病株分別比健康植株（0級）減產(chǎn)20.9%、34.4%、50.1%和71.6%，病級間產(chǎn)量差異顯著。
　　4.2014年農(nóng)業(yè)部主推的14個棉花品種為試驗材料，以中植棉2號和冀棉11為抗、感對照，根據(jù)2014年和2015年兩年數(shù)據(jù)來比較相對病情指數(shù)和相對AUDPC對棉花品種抗病性的判定差異。利用多次調(diào)查獲得相對AUDPC對不同品種的抗性評價一致性（100%）明顯高于發(fā)病高峰期獲得的相對病指(75%),結(jié)

5、果更為穩(wěn)定可靠。
　　5.通過分析不同生育期的魯棉研21和中棉所63黃萎病發(fā)生嚴(yán)重度對纖維品質(zhì)的影響，結(jié)果顯示隨著發(fā)病級別的增加，纖維長度和馬克隆值顯著降低，黃萎病對比強度、伸長率和整齊度的影響在不同年份和不同品種之間有差異；
　　6.基于熒光定量PCR技術(shù)，并結(jié)合重病田的發(fā)病情況，以不同抗病性的28個棉花品種為研究對象，探討棉苗根部病菌定殖量和抗性之間的關(guān)系，確定接菌后1天為最佳取樣時間，定殖病菌 DNA含量和品種病情指數(shù)

6、呈現(xiàn)出明顯相關(guān)性。初步確定品種根部病菌 DNA濃度在0~1 pg ng-1之間為抗性品種，1~2 pg ng-1之間的是耐病品種，大于2 pg ng-1的為感病品種。
　　綜上所述，該研究的結(jié)果表明正確把握病圃菌量、建立和產(chǎn)量相關(guān)的病害分級標(biāo)準(zhǔn)、保證科學(xué)可靠的樣本量、選擇穩(wěn)定性高的評價方法是對棉花品種黃萎病抗性真實反映的基礎(chǔ)，也是規(guī)范棉花抗性評價方法的關(guān)鍵所在。本試驗為完善制定抗病鑒定技術(shù)操作規(guī)程，規(guī)范抗性評價方法，促進棉花抗病品