棉花黃萎病抗性基因的關(guān)聯(lián)作圖及cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、棉花黃萎病(Vertieillium wilt)是由黃萎病菌(IZerticillium dahliae)引起的維管束病害，在世界范圍內(nèi)廣泛流行，目前尚未得到有效控制，選育和利用抗病品種是一種經(jīng)濟(jì)、有效的防治黃萎病危害的措施。因此必須深入了解棉花抗黃萎病基因的表達(dá)規(guī)律及棉花黃萎病與寄主的相互作用機(jī)制，為利用基因工程手段培育抗黃萎病品種提供有力的理論依據(jù)。 本研究從分子標(biāo)記和分子克隆兩個(gè)方面對(duì)黃萎病抗性機(jī)理進(jìn)行了研究和討論：(1)

2、利用不同來(lái)源的34個(gè)棉花品種，包括22個(gè)抗(耐)黃萎病品種和12個(gè)感病品種，進(jìn)行田間黃萎病抗性鑒定，同時(shí)，利用500對(duì)SSR引物對(duì)所有品種進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選有差異的引物，共得到318對(duì)多態(tài)性引物。利用模糊聚類(lèi)法，以318對(duì)引物對(duì)34個(gè)品種進(jìn)行聚類(lèi)，得到很好的與黃萎病抗性相關(guān)的聚類(lèi)圖。然后用SAS軟件分析各品種抗病陛狀與SSR標(biāo)記的關(guān)聯(lián)，得出14個(gè)SSR標(biāo)記與抗性位點(diǎn)的連鎖不平衡，這為不同遺傳背景下篩選與黃萎病抗性基因連鎖的分子標(biāo)記提供

3、了線索。 (2)為了研究棉花黃萎病抗性的相關(guān)基因，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)高抗黃萎病陸地棉材料進(jìn)行抑制消減雜交(SSH)，以黃萎病誘導(dǎo)后48小時(shí)和未誘導(dǎo)的植株分別作為T(mén)ester和Driver。提取總RNA并分離mRNA，通過(guò)合成cDNA雙鏈、抑制消減雜交及兩次PcR擴(kuò)增，富集誘導(dǎo)后植株中差異表達(dá)的片段。對(duì)兩次PCR后的產(chǎn)物純化，連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中完成文庫(kù)構(gòu)建，共獲得了434個(gè)陽(yáng)性克隆。對(duì)插入片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增后發(fā)現(xiàn)大小從0.45～